[发明专利]编码羊腺病毒(OAV287)的DNA及其作为病毒载体的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的全长基因组克隆，它是从澳大利亚绵羊中分离出的良性的腺病毒(OVA287)中获得的。本发明还涉及从良性羊腺病毒中获得的新的病毒载体，并且还涉及这些载体向动物传递和在动物中表达编码功能性RNA分子或多肽的核酸序列的应用。

发明背景

由传染性病原体和寄生虫侵染引起的疾病会导致家养动物的健康问题和生产损失，但是对许多传染性病原体并不存在疫苗。因此，在世界范围内开展了许多研究工作以开发出新的，可以预防疾病的疫苗。

当从传染性病原体和寄生虫中鉴别出一些保护性抗原后，它们若要作为疫苗成功使用需要开发出能够将这些抗原有效地传递给宿主的系统。主要从痘病毒中获得的多种重组基因表达载体已经被使用，因为它们普遍具有较低的病原性。重组病毒载体感染之后的外源蛋白质表达有可能激发宿主体内保护性的免疫应答反应。

但是，没有一种病毒载体具有各种情况下所需的所有的属性。由于一些载体所具有的生物学特性，它们比其它载体更适合某些特殊的目的。例如，常常会发现很难激发有效的具有防病作用的粘膜免疫应答。对人类，腺病毒被口服接种来预防呼吸系统疾病(1)。由于腺病毒的预防作用包括对粘膜表面的保护作用，因此很明显，它在这方面具有潜力。人的腺病毒也已被用于向肌肉(2)和其它组织传递基因。虽然在通常情况下，腺病毒并不将其DNA整合到细胞的基因组中去，然而，DNA持续存在，并且观察到了蛋白质的长期表达。从这样的细胞中表达适当的抗原可以产生全身性免疫应答，该应答可以预防同源的致病病原体。

已知的腺病毒基因组都是线性双链DNA分子，每个末端都具有一个反向末端重复序列(ITR)，并且有一个蛋白质共价结合在5’末端的C残基上(3)。2、5、12和40型人腺病毒的基因组序列和结构已被完全确定，大量其它类型的已被部分确定，包括一些从动物中分离出的(参见Genebank和EMBL核酸数据库)。2型人腺病毒是第一个要被测序的基因组，但是一般来说，它的基因组的排列被保留在其它被表征的腺病毒中，即早期区域E1-E4和结构蛋白同系物可以在基因组的相似位置被识别出来。具体地说，E1A/E1B区位于基因组左侧的末端，E4总是位于基因组右侧的末端。早期区域E3总是位于结构蛋白pVIII和尾丝的基因之间，虽然它的大小和复杂程度随种的不同而变化，举例来说，它在人腺病毒中为3kb，有至少10个开放阅读框架，在鼠腺病毒中为大约0.7kb，只有2个明显开放阅读框架(4，5)。对于重组病毒的构建来说，E3是一个关键区域，因为它是体外复制所非必需的(6)。晚期的L区域从主晚期启动子开始表达，主晚期启动子和结合的复合体产生了mRNA系，它编码大部分结构病毒蛋白。IVa2和IX蛋白看来具有它们自己的启动子。

虽然有一些可以用于医疗目的的人病毒载体，但是很少有适合于兽医应用的动物病毒载体。为了获得一种更加适合的动物病毒载体，本发明人纯化了一种从西澳大利亚的绵羊身上分离出的羊腺病毒(OAV287)。该羊腺病毒从血清学角度与7型牛腺病毒有关，但是从遗传学角度，它不同于牛腺病毒和其它澳大利亚羊分离物，正如在限制性酶图谱的基础上进行的羊和牛腺病毒的比较所显示的(8)。本发明的病毒的基因组排列显著不同于所有其它已知的腺病毒。本发明的腺病毒的DNA分子适合于用作病毒载体，当用于兽医学目的时，该载体能够表达多种多肽。

发明概述

第一方面，本发明涉及分离的DNA分子，它包含编码基本上如图1所示的羊腺病毒(OAV287)基因组的核酸序列，或功能等价核酸序列。优选地，核酸序列编码基本上如图1所示的腺病毒的基因组。

在本发明第一方面的更优选的实施方案中，DNA分子包含编码羊腺病毒(OAV287)的基因组的核酸序列，其中去除或改变了腺病毒基因组中的一部分，该部分是天然腺病毒维持或生存所非必需的。

第二方面，本发明涉及一种DNA分子，它包括至少一个15核酸碱基序列，该序列对示于图1的羊腺病毒(OAV287)基本上是特异性的。在本发明第二方面的优选实施方案中，至少十五个核酸碱基的序列编码一个羊腺病毒(OAV287)的功能性元件。优选地，该功能性元件选自启动子、基因、反向末端重复序列、病毒包装信号和RNA加工信号。羊腺病毒(OAV287)的反向末端重复序列包含该病毒双链DNA基因组的每条链上5，末端的最初46个核酸碱基。