[发明专利]用于生产具有提高的抗原性的肠细菌的方法及包含此种细菌的疫苗

权利要求书

1.一种产生具有提高的抗原特性的肠细菌的方法，其中肠细菌选自：弯曲杆菌属，耶尔森氏菌属，类杆菌属，克雷白氏杆菌属，Gastrospirillumsp.，肠杆菌属，沙门氏菌属，志贺氏菌属，气单胞菌属，弧菌属，梭状芽胞杆菌属，肠球菌属，和大肠杆菌，该方法包括在体外在一些条件的组合之下生长肠细菌的培养物，这些条件包括：

a)大约0.05％至大约3％胆汁或大约0.025％至大约0.6％一种或多

  种胆汁酸或其盐；

b)温度在大约30℃至大约42℃之间；

c)在空气中或在微需氧条件下，其中微需氧条件包括i)大约5％至大

约20％CO₂和大约80％至大约95％空气；ii)大约5％至大约20％

CO₂和大约80％至大约95％N₂；或iii)大约5％至大约10％O₂

和大约10％至大约20％CO₂和大约70％至大约85％N₂；

和

d)一种二价阳离子螯合剂，选自：0至100μM的BAPTA/AM，0

至大约10mM的EGTA，和0至大约100μM的EGTA/AM，生长一段足够的时间，这样，培养物处于一个在大约是对数早期，在对数早期和稳定期之间，或在大约是稳定期的生长期。

2.权利要求1的方法，其中所述胆汁盐或酸包括脱氧胆酸盐或甘胆酸盐。

3.权利要求1的方法，其中所述肠细菌是弯曲杆菌属的种。

4.权利要求3的方法，其中所述肠细菌是空肠弯曲杆菌或大肠弯曲杆菌。

5.权利要求4的方法，其中所述空肠弯曲杆菌是这样的空肠弯曲杆菌菌株，它选自：134，195，170，81-176，6，81-116，35，52，VC-167，88，244，544，699，1180，910，和HC。

6.权利要求5的方法，其中所述空肠弯曲杆菌是空肠弯曲杆菌菌株81-176条件组合包括：

a)大约0.1％胆汁盐，它是脱氧胆酸盐或大约0.8％胆汁；

b)温度是大约37℃；

c)在大约10％至大约20％CO₂和大约80％至大约90％空气，和培养物生长一段足够时间，这样，培养物处于稳定期。

7.权利要求1的方法，其中所述肠细菌是志贺氏菌属的细菌。

8.权利要求7的方法，其中所述肠细菌是志贺氏菌属的种，选自弗氏，宋内氏，痢疾和鲍地氏志贺氏菌。

9.权利要求8的方法，其中所述志贺氏菌是弗氏志贺氏菌或痢疾志贺氏菌。

10.权利要求9的方法，其中所述弗氏志贺氏菌是弗氏志贺氏菌2457T，条件的组合包括：

a)大约0.1％脱氧胆酸盐或大约0.8％胆汁；

b)温度是大约37℃；

c)在空气中；而且

培养物生长一段充分的时间，这样使培养物处于对数早期。

11.权利要求1的方法，其中所述肠细菌是耶尔森氏菌。

12.权利要求1的方法，其中所述肠细菌是大肠杆菌。

13.权利要求12的方法，其中所述大肠杆菌是肠毒性的，肠溶血性的，肠病原性的，或肠侵袭性大肠杆菌菌株。

14.权利要求1的方法，其中所述肠细菌是弧菌。

15.权利要求1的方法，其中所述肠细菌是沙门氏菌。

16.权利要求1的方法，其中所述肠细菌是类杆菌。

17.权利要求1的方法，其中所述肠细菌是梭状芽胞杆菌。

18.权利要求1的方法，其中所述肠细菌是肠球菌。

19.权利要求1的方法，其中所述肠细菌是克雷白氏菌。

20.权利要求1的方法，其中所述肠细菌是肠杆菌。

21.权利要求1的方法，其中所述肠细菌是Gastrospirillum sp。