[发明专利]刺激粘膜免疫的免疫原

说明书

发明领域

本申请涉及针对某些生物体产生粘膜抗体的方法，这些生物体通过与哺乳动物粘膜接触而感染其宿主。本申请特别涉及适于产生免疫原而诱导粘膜抗体的蛋白复合物及基因构建物，还涉及将免疫原引入哺乳动物产生粘膜免疫应答的方法。

发明背景

各种引起疾病的感染诱发因素一般均能接触身体的粘膜表面。这些表面包括胃肠道、泌尿生殖道和呼吸道。身体的外表面受连续的角质化鳞样上皮层保护，而身体的粘膜表面缺乏这种角质化的保护层，因此更易受偶然侵入的生物体感染。毫不奇怪，这些表面(粘膜表面)成为外源微生物进入体内的主要入口。

身体粘膜表面有广泛的免疫系统。无包被的淋巴样组织以分散的细胞团或有组织的淋巴结形式散布于胃肠道和泌尿生殖道的粘膜。分散的淋巴样细胞团散布于本体纤层，而淋巴结或者称派伊尔氏淋巴结，包括增殖的B细胞的生发中心和T细胞活性的周边区域，更多集中于粘膜的某些部位。

粘膜表面的淋巴样细胞能对外源抗原作出应答。覆盖派伊尔氏淋巴结的肠道表皮允许抗原转运入淋巴样组织，有抗原呈递细胞的功能(Bromander，et al.《斯堪的那维亚免疫学杂志》37：452-458，1993)。分泌的IgA(sIgA)能穿越粘膜，常是偶然侵入的诱发因素接触哺乳动物粘膜表面所遇到的第一道防御。

能有效阻止因粘膜感染而引起的疾病的疫苗优选′刺激IgG和分泌的IgA。限制粘膜感染的有效疫苗可能引起并显示分泌的IgA活性。

许多性传播疾病，如衣原体病、淋病、梅毒、软下疳、滴虫病均由通过粘膜进入体内的生物体引起。尽管这些疾病由不同生物引起并以不同方式复制，但这些性传播微生物及其他微生物均主要通过粘膜屏障进入机体。这些及大多数其他引起疾病的生物均携带独特的抗原决定簇，刺激免疫系统。此外，粘膜表面也是大多数病毒的主要入口。因此，对病毒，包括但不限于流感病毒、乳头状瘤病毒，HIV、疱疹病毒家族成员及其他类似病毒的粘膜表面免疫也在感染、繁殖阶段及病毒释放的部分时期与粘膜表面整体相关。开发针对这些生物体的疫苗的尝试并不成功，因为非胃肠道的疫苗一般不产生明显水平的分泌免疫。

非病毒的性传播疾病如诊断早可以得到治愈，但许多这种疾病早期症状轻微，因此直到症状加重才去治疗。

衣原体病是主要感染宿主泌尿生殖道系统粘膜的性传播疾病的例子。沙眼衣原体是美国首要的性传播生物体，每年约感染4百万人(STD/HIV预防部门，1992年年报，CDC，亚特兰大，1993)。衣原体病主要通过阴道性交或肛门性交染上，也能通过口交传染。生殖道感染沙眼衣原体能引起妇女输卵管炎，引起输卵管阻塞和不育。据估计在美国每年有200,000妇女由于衣原体病输卵管炎而不育，而且，感染此病的人得HIV的危险性增大(Wasserhiet.“流行病学的增效作用：人类免疫缺陷病毒感染和其他性传播疾病的相互关系”性传播疾病，19：61-77，1992)。极其需要改进控制该疾病病理学表现的方法。

沙眼衣原体分离物有15个不同的血清型，分属3个亚组，主要外膜蛋白(MOMP)决定血清型和血清组特性。对衣原体的保护免疫就是针对主要外膜蛋白的免疫应答。

衣原体主要外膜蛋白的比较分析表明MOMP基因保守，有4个可变区对每种血清型均是独特的。这些可变区决定血清型，亚种，血清组或种特异性的抗体，可变区IV(VDIV)是最大的MOMP可变区，位于蛋白的C-末端。VDIV含亚种、血清组抗原决定簇和一个保守的种特异性的抗原决定簇。MOMP所有的可变区均是外部表位，这由其对胰蛋白酶的敏感性及其对抗体结合的可及性所证实。本发明涉及将来自MOMP或其他病原体蛋白的抗原决定簇与粘膜结合多肽结合在一起，这些病原体包括但不限于HIV，肝炎病毒和肠道毒性大肠杆菌，它们均通过接触粘膜而感染哺乳动物宿主。