[发明专利]在相同细胞中表达猪生殖呼吸综合症病毒多肽

说明书

本发明涉及制备PRRSV ORF3或ORF4蛋白质的糖基化形式的方法，用于该方法的宿主细胞或载体病毒，编码所述ORF3或ORF4蛋白质的DNA分子，所说的ORF3或ORF4蛋白质的糖基化形式以及包含所说的ORF3或ORF4蛋白质的疫苗。

猪生殖呼吸综合症病毒(PRRSV)是一种新的猪疾病的病因，从1990年底起，它袭击了5,000多个北欧养猪农场。现在称作猪生殖呼吸综合症(PRRS)的这种疾病也称为神秘猪疾病。1990年12月首次在德国鉴定后，在1991年年初问题变得越来越严重。1991年1月和2月，该疾病传播到荷兰和比利时。也有报道蔓延到西班牙。从经济观点来看，预测该疾病的代价将会非常高昂，和Aujeszky′s疾病差不多甚至比它更坏。

在大母猪中的基本临床证状是厌食和在受孕达110天后流产。对于小猪观察到除呼吸困难外的死产和/或病弱小猪的高发病率。在养肥的猪中出现慢性肺炎和死亡率升高。

为了开发保护猪以抵抗PRRS的疫苗或开发在猪中检测感染的诊断方法，必须鉴定、分离该疾病的病原体并使其适于作为诊断试验中疫苗或抗原的免疫原。

常规疫苗可包含化学灭活的病毒疫苗或经修饰的活病毒疫苗。然而，灭活的疫苗需要额外免疫，具有包含佐剂的不利因素，生产昂贵且用药费力。而且，一些感染性病毒颗粒可能在灭活过程中存活并在施用到动物体后引起疾病。

一般来说，优选减毒的活病毒疫苗，因为它们诱发常以体液和细胞反应两者为基础的免疫应答。直到现在，这种以PRRSV病毒株为基础的疫苗仅以在巨噬细胞培养物中培养和系列传代有毒病毒株来制备。然而，由于这种处理将无法控制的突变导入了病毒基因组，导致病毒颗粒群体的毒性和免疫特性不均匀。另外，已熟知这类传统的减毒活病毒疫苗可回复突变成有毒型，引起接种的动物发病并可能将病原体传给其它动物。而且在巨噬细胞系上培养PRRSV病毒株非常费力从而使所得的病毒产量很低。

根据重组DNA技术可构建改进的疫苗(活的和亚单位疫苗)。这些疫苗可仅含有能诱发抗PRRSV病原体免疫应答的必须的和相关的PRRSV免疫原性物质或编码所说物质的遗传信息而不表现出活的或灭活的疫苗的上述不利情况。

现在已知该疾病的病原体是一种小的被膜RNA病毒，Wensvoort等(The Vet.Quarterly 13，121-130，1991)描述了该病毒的欧洲型。Conzelmann等(Virology 193，329-339，1993)和Meulenberg等(Virology 192，62-72，1993)描述了它与乳酸脱氢酶升高病毒(LDV)和马动脉炎病毒的亲缘关系，因此将该病毒放入动脉炎病毒科(Arteriviridae)的组中。

这种欧洲型的一个病毒株称为″Lelystad病毒″(LV)以nr.I-1102保藏于法国巴黎的巴斯德研究所并与荷兰Lelystad兽医研究中心提交的PCT WO 92/21375相联系。

在EPA no.91.202,646.5中描述了另一种欧洲病毒株，并以nr.I-1140保藏于法国巴黎巴斯德研究所的Collection NationaledeCultures de Micro-organismes(CNCM)。

Conzelmann等(Viology 193，329-339，1993)最近描述了这种欧洲病毒株。

Benfield等描述了该病毒的美国型(J.Vet.Diagn.Invest.4，127-133，1992)。一种美国型的病毒株以nr.VR-2332保藏于ATCC并在PCT WO 93103760和欧洲专利申请0529584中提到。在该病毒发现后的早期，当Wensvoort等(J.Vet.Diagn，Invest.4，134-138，1992)根据其抗原性特征比较美国和欧洲毒株时进行了重要观察并证实欧洲和美国毒株表现出相当大的抗原性差异。

PRRSV的两个欧洲病毒株的基因组和美国分离物的部分基因组已被分子克隆和测序(PCT WO92/21375；Meulenberg etal.，Virology 192，62-72，1993；Conzelmann et al.，出处同上；Kwang etal.，J.Vet Diagn，Invest.6,293-296，1994；Mardassiet al，J.Gen.Virol.75，681-685，1994；Meng et al.，Proc.13th IPVSCongress，61，1994)。