[发明专利]诱导对表皮生长因子受体的免疫应答的抗独特型抗体

说明书

本发明涉及抗独特型抗体，它对带有表皮生长因子受体(EGFR)作为抗原的肿瘤能诱导免疫应答。首先，本发明涉及的抗独特型抗体具有这种抗原的内部影象并能模拟人EGFR的外部结构域。作为本发明的优选方案，提到的抗体都来自于鼠mAb425或来自它的人源化及嵌合形式。本发明的抗体可用于肿瘤免疫治疗和免疫预防。

本发明说明书中涉及的几个缩略语和其限定的技术含意如下：

“FR”(framework regions骨架区)：指的是轻或重链可变区的4个亚区，这里支撑着3个CDR。

“CDR”(complementarity determining regions，互补决定区)：指的是轻或重链可变区的3个亚区、这里有高变序列并形成在使其与抗原直接接触中起主要作用的环状结构。

“EGF”和“EGFR”：指的是表皮生长因子和它的受体。

“PCR”：指的是聚合酶链反应。

“scFv”：指的是单链Fv，它是一种抗体片段。

“V_L”：指的是轻链可变区。

“V_K”：指的是Kappa轻链可变区。

“V_H”：指的是重链可变区。

“嵌合”或部分人源化抗体指的是含有来自人源的恒定区和非人源的(如小鼠的)可变区(包括CDR)的抗体。

人源化或完全人源化抗体指的是含有来自人源的恒定区和FR，而CDR来自非人源。

“Ab1”：指的是一抗或初始抗体，通过免疫接种可诱导一连串的连续抗体。

“Ab2”：指的是典型的抗独特型抗体(＝“抗-id”)它是针对Ab1的独特型的。

“Ab3”：指的是针对Ab2独特型的抗独特型抗体，因而它与Ab1可比。

PBS指磷酸盐缓冲液。

FCS指胎牛血清。

HBSS指Hanks平衡盐水缓冲液。

FITC指异硫氰酸荧光素。

MTC指混合细胞培养。

KLH指Keyhole Limpet Hemocyanine，即匙孔血蓝蛋白。

CFA指福氏完全佐剂。

HRPO指人重组过氧化物酶。

抗独特型抗体(抗独特型或抗-id)是针对位于抗原结合区上或另一抗体分子可变区上的表位(称独特型)的抗体。独特型(Ab1)和抗独特型(Ab2)之间的相互作用在保持体内免疫平衡上起重要作用。解决免疫调节作用要求助于独特型和抗独特型网络(学说)(Jerne，F.G.，1974，Ann.Immunol.125C：373)。“内部影像”指抗独特型抗体模拟可被Ab1识别的抗原的三维结构。免疫接种Ab2可诱导产生针对起始抗原的Ab3。已在几种传染疾病和癌症治疗中成功应用了独特型疫苗(如Uytdehaag.F.G和C.M.H.Osterhaus，1986，J.Immanol.134：1225；Kennedy.R.C.等，1986，Science 232：220；Hiernaux，J，R，1988；56：1407；Stein，K.E.和T.Soderstrom，1984，J.Exp.Med，160：1001)。在肿瘤免疫方面，已在体内、体外试验中用过独特型免疫接种来调节肿瘤生长(Smorodinsky，N.I.等，1988；Eur，J.Immunol.18：1713，Viale，G；等，1987，J.Immunol.139：4250)。Herlyn等报道了在晚期结肠直肠癌病人上所作的临床试验的可喜结果。在仅用抗独特型抗体治疗的病人中观察到肿瘤不再转移并伴有部分临床症状减轻。有关抗独特型抗体及其在肿瘤治疗中的应用还可从诸如US4,918,164和EP0141783中了解到。

表皮生长因子(EGF)是一种多肽激素，它对表皮和上皮细胞是一种有效分裂素。当EGF与敏感细胞相互作用时，它就结合到膜受体(EGFR)上。EGFR是一种分子量约为170K的跨膜糖蛋白，是c-erb-B原癌基因的一种基因产物。

MAb425是针对已知的人A431癌细胞系(ATCCCRL1555)的鼠单克隆抗体，能结合到人EGFR的外部结构域的多肽表位上并抑制EGF的结合。人们发现MAb425(ATCC HB9629)在体外参与调解肿瘤细胞毒性并抑制表皮样瘤细胞生长和结肠直肠癌衍化细胞系的生长。(Rodeck等；Cancer Res.1987.47：3692)。人源化和嵌合形式的MAb425公布在WO92/15683中。