[发明专利]可促进人肺腺癌细胞分化的cDNA及其真核表达载体及应用

说明书

本发明涉及一种能促进人肺腺癌细胞分化的cDNA，包含该cDNA的真核表达载体以及该cDNA在制备治疗肿瘤的制剂中的应用。所述的cDNA是从维甲酸处理的人肺腺癌细胞系中分离得到。

肺癌对人类生命、健康的威胁日趋严重，在工业发达国家和地区，男性肺癌发病率高居各类肿瘤之首，女性肺癌发病率仅次于乳腺癌而居第二位。在我国，肺癌发病率有超过胃癌而跃居第一位的趋势。肺癌患者预后很差。其五年生存率仅为10-15％，其中小细胞肺癌五年生存率低于5％。20余年来，尽管对某些肿瘤的治疗取得了成功或取得重大进展，但传统的手术、放疗和化疗三大疗法并未能改善大多数肺癌患者的预后，降低死亡率。近20年来，肿瘤分子生物学研究取得了重大进展。现已明确，癌的发生是细胞增殖失控和分化障碍的结果，细胞癌基因的激活和抑癌基因的失活是造成细胞生长与分化调控紊乱的根本原因。因此，应用各种方法分离肿瘤抑制基因或促分化基因，对于阐明肿瘤发生的内在机制和设计有效防治措施都具有重要意义。

维甲酸(Retinoic Acid.，RA)是维生素A的代谢产物，对人体的正常形态发生、发育和细胞分化起重要调节作用。近10多年的研究结果表明，RA对某些完全转化的、具有转移性的肿瘤细胞产生增生抑制或诱导终末分化作用，能够使某些肿瘤的恶性程度降低或去恶性化。尽管并不是各种肿瘤都对RA有这样的反应，然而，这些发现无疑对肿瘤治疗提供了一个新线索。在很多情况下，恶性肿瘤是一种细胞异常分化的疾病，对于那些具有侵袭性的细胞可以通过调节其细胞分化而不是应用细胞毒药物杀死细胞的方法得到控制。由此为RA的肿瘤分化治疗作用提供了理论依据。

由于RA对多种肿瘤的增殖抑制和/或分化诱导作用，使其成为某些恶性肿瘤的分化诱导剂和化学预防剂。中国医学科学院肿瘤研究所林培中等(中华肿瘤杂志10(3)：161-166，1988；中国医学科学院学报12(4)：235-245，1990)从80年代初即开始用我国新研制的维甲类化合物在食管癌高发区进行食管癌的阻断性研究，使有食管粘膜重度增生者的癌变率明显降低；黄萌茸等(Huang ME，Ye YuChen et al，Blood 73：567-572，1988)在国际上首次用全反式维甲酸治疗急性早幼粒白血病患者取得成功。但RA对细胞增殖分化调节的分子机制一直是个谜。近10年来，随着维甲酸受体基因的克隆，对这个问题的认识发生了质的飞跃。目前认为，维甲酸作用的机制是：维甲酸与细胞核内的维甲酸受体结合后作为转录因子与特异性顺式作用DNA序列结合，调节靶基因的转录活性。虽然受调控基因的具体数量和顺序尚未弄清，但一般认为维甲酸是启动了级联(Cascade)式的转录调节，导致一系列分化基因的激活和增殖基因的受抑。至今已有越来越多的RA靶基因得到认识，也分离、克隆出了一些引起细胞分化的新基因。这不仅使肿瘤细胞分化治疗的理论认识深化了一步，也有可能成为一类恶性肿瘤基因治疗的目的基因。80年代末，本室在发现RA可引起食管癌细胞系生长的抑制及终末分化的基础上，应用cDNA消减杂交技术，已从诱导分化的食管癌细胞系中分离出一个具有抑癌作用的cDNA片段(见中国专利申请95101293.2)。

因此，本发明的第一个目的在于提供一种可促进人肺腺癌细胞分化的cDNA，所述的cDNA是从维甲酸处理的人肺腺癌细胞系中分离得到，其对人肺腺癌细胞等肿瘤细胞具有明显的生长抑制作用。

本发明的第二个目的在于提供包含所述的cDNA的真核表达载体。

本发明的第三个目的在于该cDNA在制备治疗肿瘤的制剂中的应用。

相应地，根据本发明的一个方面，本发明涉及一种可促进人肺腺癌细胞分化的cDNA，其全长为1859bp，核苷酸序列见序列表(SEQ ID NO：1)。所述的cDNA是通过用全反式维甲酸诱导人肺腺癌细胞系GLC-82使其发生分化，从其cDNA文库中利用cDNA消减杂交分离得到。