[发明专利]用光散射测定阿马多利化合物的方法

说明书

本发明涉及定量测定糖化白蛋白、糖化血红蛋白、糖化球蛋白等的阿马多利(Amadori)化合物的方法。

阿马多利化合物是具有蛋白质、肽或氨基酸类的氨基的物质(以下称蛋白质等)和醛糖类还原性糖共存时，一部分氨基和醛基非酶地，且不可逆地结合，进行阿马多利转位而生成的。阿马多利化合物的生成速度，用反应性物质浓度、接触时间、温度等函数表示。因此，可认为从其生成量可得到与物质有关的各种信息，所说的物质含有其反应性物质。作为含有阿马多利化合物的物质，有酱油等食品、血液等体液。

例如，在生物体中，葡萄糖和氨基酸结合，生成阿马多利化合物的果糖氨基衍生物。将血液中的血红蛋白被糖化后的果糖氨基衍生物称为糖血红蛋白、将血液中的白蛋白被糖化后的果糖氨基衍生物称为糖白蛋白、将血液中的蛋白质被糖化后的果糖氨基衍生物称为果糖胺。这些果糖氨基衍生物在血中浓度，反映了过去一定时期的平均血糖值，由于其测定值是糖尿病症状诊断及管理的重要指标，所以确立阿马多利化合物测定手段，在临床上是极其有用的。另外，通过定量食品中的阿马多利化合物，可知道其食品制造后的保存状况及时间，在质量管理上很起作用。

这样，阿马多利化合物的定量分析，在包括医学及食品的广范围内是有用的。

以往，作为阿马多利化合物的定量法，已知有利用高速液相色谱的方法(参照chromatogr.Sci.，.10，659(1979))、使用充填结合硼酸的固体的柱的方法(参照clin.chem.，28，2088(1982))、电泳法(参照clin.chem.，26，1598(1980))、利用抗原一抗体反应的方法(参照J.JCLA，18，620(1993)，机器·试剂，16，33-37(1993))、果糖胺的测定法(参照clin，chem.Acta，127，87-95(1982))、在使用硫代巴比士酸氧化后比色定量方法(参照clin.chem.Acta，112，179-204(1981))、放射免疫法(RIA)法等。

电泳法及色谱法，在测定上费时间、操作繁杂，蛋白质绝对量的测定值，受到混合物质中亲合力大小接近的物质影响，而难以准确地定量测定。

RIA法，灵敏度、特异性及再现性优良，但标识过程繁杂。

果糖胺测定法是利用果糖胺在碱溶液中的还原力的方法，但由于受到其他还原物质影响，有容易产生测定误差的缺点。

只要能将光照射在物质上，使用其光散射光谱，定量糖化蛋白质等的阿马多利化合物，就是简便而有效的，但目前尚没有利用这种光散射光谱测定阿马多利化合物的报告。

因此，本发明的目的在于提供一种利用光散射的简便光学方法，定量测定阿马多利化合物的方法。

在本发明中，在含有阿马多利化合物的试样上照射单一波长的激发光，接受来自该试样的散射光、进行分光，得到光散射光谱，在该光散射光谱中使用，作为相对于激发光波长的偏移波数(波矢)，存在于820-840cm^-1、1655-1660cm^-1、2000-2020cm^-1、2080-2100cm^-1、2460-2470cm^-1或2530-2600cm^-1的光散射峰值，定量测定阿马多利化合物。

在含有阿马多利化合物的试样中，照射单一波长的激发光得到的光散射光谱，光散射峰与荧光光谱重叠。若进行除去该荧光光谱部分的运算操作，可容易地求出光散射峰中任何一个峰的峰强度或积分值。这样，按照求得的光散射峰的峰强度或积分值，可定量测定阿马多利化合物。

这样，在本发明中，在试样中照射单一波长的激发光，因为只从其试样接受散射光并分光，所以可通过简便的光学测定法，定量测定阿马多利化合物。

其中的定量测定，既包括测定试样中阿马多利化合物量；也包括测定试样中蛋白质等的糖化率。糖化率定义如下：

(阿马多利化合物)/(阿马多利化合物+蛋白质等)。

其中任何一个测定值，都是通过标准曲线求出的。