[发明专利]抗假肥大型肌营养不良症特异性抗体Anti5～7无效
| 申请号： | 96118826.X | 申请日： | 1996-09-28 |
| 公开（公告）号： | CN1178242A | 公开（公告）日： | 1998-04-08 |
| 发明（设计）人： | 颜真;苏成芝 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/70;C12P21/08;A61K39/395 |
| 代理公司： | 西北地区军队院校专利事务所 | 代理人： | 秦红 |
| 地址： | 710032 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抗假肥 大型 营养不良 特异性 抗体 anti5 | ||
1.抗Dystrophin特异性抗体Anti5～7，其制备方法为：首先对DMD基因cDNA5～7kb的片段进行了测序，然后对片段两端克隆位点进行修饰，以原开放读框克隆入原核表达载体，同时在其5′端融合了10个氨基酸的碱基，然后在大肠杆菌中进行诱导表达，电洗脱纯化表达蛋白，与福氏佐剂混合后免疫大白兔而制得.DMD cDNA5-7蛋白的基因序列及氨基酸序列为： ------------------------------------------------------------
GlnTyrLysArgGlnAlaAspAspLeuLeuLysCysLeuAspAspIleGluLys
66 78 90 102
CAGTACAAGAGGCAGGCTGATGATCTCCTGAAATGCTTGGATGACATTGAAAAA
GTCATGTTCTCCGTCCGACTACTAGAGGACTTTACGAACCTACTGTAACTTTTT ------------------------------------------------------------
LysLeuAlaSerLeuProGluProArgAspGLuArgLysIleLysGluIleAsp
120 132 144 156
AAATTAGCCAGCCTACCTGAGCCCAGAGATGAAAGGAAAATAAAGGAAATTGAT
TTTAATCGGTCGGATGGACTCGGGTCTCTACTTTCCTTTTATTTCCTTTAACTA ------------------------------------------------------------
ArgGluLeuGlnLysLysLysGluGluLeuAsnAlaValArgArgGlnAlaGlu
174 186 198 210
CGGGAATTGCAGAAGAAGAAAGAGGAGCTGAATGCAGTGCGTAGGCAAGCTGAG
GCCCTTAACGTCTTCTTCTTTCTCCTCGACTTACGTCACGCATCCGTTCGACTC ------------------------------------------------------------
GlyLeuSerGluAspGlyAlaAlaMetAlaValGluProThrGlnIleGlnLeu
228 240 252 264
GGCTTGTCTGAGGATGGGGCCGCAATGGCAGTGGAGCCAACTCAGATCCAGCTC
CCGAACAGACTCCTACCCCGGCGTTACCGTCACCTCGGTTGAGTCTAGGTCGAG ------------------------------------------------------------
SerLysArgTrpArgGluIleGluSerLysPheAlaGlnPheArgArgLeuAsn
282 294 306 318
AGCAAGCGCTGGCGGGAAATTGAGAGCAAATTTGCTCAGTTTCGAAGACTCAAC
TCGTTCGCGACCGCCCTTTAACTCTCGTTTAAACGAGTCAAAGCTTCTGAGTTG ------------------------------------------------------------
PheAlaGlnIleHisThrValArgGluGluThrMetMetValMetThrGluAsp
336 348 360 372
TTTGCACAAATTCACACTGTCCGTGAAGAAACGATGATGGTGATGACTGAAGAC
AAACGTGTTTAAGTGTGACAGGCACTTCTTTGCTACTACCACTACTGACTTCTG ------------------------------------------------------------
MetProLeuGluIleSerTyrValProSerThrTyrLeuThrGluIleThrHis
390 402 414 426
ATGCCTTTGGAAATTTCTTATGTGCCTTCTACTTATTTGACTGAAATCACTCAT
TACGGAAACCTTTAAAGAATACACGGAAGATGAATAAACTGACTTTAGTGAGTA ------------------------------------------------------------
ValSerGlnAlaLeuLeuGluValGluGlnLeuLeuAsnAlaProAspLeuCys
444 456 468 480
GTCTCACAAGCCCTATTAGAAGTGGAACAACTTCTCAATGCTCCTGACCTCTGT
CAGAGTGTTCGGGATAATCTTCACCTTGTTGAAGAGTTACGAGGACTGGAGACA ------------------------------------------------------------
AlaLysAspPheGluAspLeuPheLysGlnGluGluSerLeuLysAsnIleLys
498 510 522 534
GCTAAGGACTTTGAAGATCTCTTTAAGCAAGAGGAGTCTCTGAAGAATATAAAA
CGATTCCTGAAACTTCTAGAGAAATTCGTTCTCCTCAGAGACTTCTTATATTTT ------------------------------------------------------------
AspSerLeuGlnGlnSerSerGlyArgIleAspIleIleHisSerLysLysThr
552 564 576 588
GATAGTCTACAACAAAGCTCAGGTCGGATTGACATTATTCATAGCAAGAAGACA
CTATCAGATGTTGTTTCGAGTCCAGCCTAACTGTAATAAGTATCGTTCTTCTGT ------------------------------------------------------------
AlaAlaLeuGlnSerAlaThrProValGluArgValLysLeuGlnGluAlaLeu
606 618 630 642
GCAGCATTGCAAAGTGCAACGCCTGTGGAAAGGGTGAAGCTACAGGAAGCTCTC
CGTCGTAACGTTTCACGTTGCGGACACCTTTCCCACTTCGATGTCCTTCGAGAG ------------------------------------------------------------
SerGlnLeuAspPheGlnTrpGluLysValAsnLysMetTyrLysAspArgGln
660 672 684 696
TCCCAGCTTGATTTCCAATGGGAAAAAGTTAACAAAATGTACAAGGACCGACAA
AGGGTCGAACTAAAGGTTACCCTTTTTCAATTGTTTTACATGTTCCTGGCTGTT ------------------------------------------------------------
GlyArgPheAspArgSerValGluLysTrpArgArgPheHisTyrAspIleLys
714 726 733 750
GGGCGATTTGACAGATCTGTTGAGAAATGGCGGCGTTTTCATTATGATATAAAG
CCCGCTAAACTGTCTAGACAACTCTTTACCGCCGCAAAAGTAATACTATATTTC ------------------------------------------------------------
IlePheAsnGlnTrpLeuThrGluAlaGluGlnPheLeuArgLysThrGlnIle
768 780 792 804
ATATTTAATCAGTGGCTAACAGAAGCTGAACAGTTTCTCAGAAAGACACAAATT
TATAAATTAGTCACCGATTGTCTTCGACTTGTCAAAGAGTCTTTCTGTGTTTAA ------------------------------------------------------------
ProGluAsnTrpGluHisAlaLysTyrLysTrpTyrLeuLysGluLeuGlnAsp
822 834 846 858
CCTGAGAATTGGGAACATGCTAAATACAAATGGTATCTTAAGGAACTCCAGGAT
GGACTCTTAACCCTTGTACGATTTATGTTTACCATAGAATTCCTTGAGGTCCTA ------------------------------------------------------------
GlyIleGlyGlnArgGlnThrValValArgThrLeuAsnAlaThrGlyGluGlu
876 888 900 912
GGCATTGGGCAGCGGCAAACTGTTGTCAGAACATTGAATGCAACTGGGGAAGAA
CCGTAACCCGTCGCCGTTTGACAACAGTCTTGTAACTTACGTTGACCCCTTCTT ------------------------------------------------------------
IleIleGlnGlnSerSerLysThrAspAlaSerIleLeuGlnGluLysLeuGly
930 942 954 966
ATAATTCAGCAATCCTCAAAAACAGATGCCAGTATTCTACAGGAAAAATTGGGA
TATTAAGTCGTTAGGAGTTTTTGTCTACGGTCATAAGATGTCCTTTTTAACCCT ------------------------------------------------------------
SerLeuAsnLeuArgTrpGlnGluValCysLysGlnLeuSerAspArgLysLys
984 996 1008 1020
AGCCTGAATCTGCGGTGGCAGGAGGTCTGCAAACAGCTGTCAGACAGAAAAAAG
TCGGACTTAGACGCCACCGTCCTCCAGACGTTTGTCGACAGTCTGTCTTTTTTC ------------------------------------------------------------
ArgLeuGluGluGlnLysAsnIleLeuSerGluPheGlnArgAspLeuAsnGlu
1038 1050 1062 1074
AGGCTAGAAGAACAAAAGAATATCTTGTCAGAATTTCAAAGAGATTTAAATGAA
TCCGATCTTCTTGTTTTCTTATAGAACAGTCTTAAAGTTTCTCTAAATTTACTT ------------------------------------------------------------
PheValLeuTrpLeuGluGluAlaAspAsnIleAlaSerIleProLeuGluPro
1092 1104 1116 1128
TTTGTTTTATGGTTGGAGGAAGCAGATAACATTGCTAGTATCCCACTTGAACCT
AAACAAAATACCAACCTCCTTCGTCTATTGTAACGATCATAGGGTGAACTTGGA ------------------------------------------------------------
GlyLysGluGlnGlnLeuLysGluLysLeuGluGlnValLysLeuLeuValGlu
1146 1158 1170 1182
GGAAAAGAGCAGCAACTAAAAGAAAAGCTTGAGCAAGTCAAGTTACTGGTGGAA
CCTTTTCTCGTCGTTGATTTTCTTTTCGAACTCGTTCAGTTCAATGACCACCTT ------------------------------------------------------------
2.根据权利要求1所述的抗体Anti5～7，其特征在于所制备的抗体基因具有以下特点：a.该段基因对应于DMD基因缺失突变热点区；b.该段基因正好包含着Dystrophin蛋白分子上一段功能不明的蛋白敏感区对应的编码部位。
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