[发明专利]蛙病毒疫苗

说明书

本发明涉及水产养殖动物疾病防治的药物，特别涉及名特优水产养殖动物的疾病预防和治疗的抗病毒疫苗。该疫苗包括病毒、用于增殖该病毒的宿主细胞及其制备技术。

沼泽绿牛蛙(Rana grylio)又称美国青蛙，自80年代后期引入我国后，其养殖业发展很快，但遗憾的是沼泽绿牛蛙的病害也随之增加。据不完全统计，养蛙业每年因病致死而损失的人民币在5000万元以上。其病症表现有红腿病、水霉病、气泡病、脱皮病、肿腿病、烂皮病等，有些病表面上似乎为菌类感染，但实质上很可能是由于病毒首先入侵所致。抗菌素类的药物对这类疾病不起作用或效果很有限。目前国内尚无蛙病毒病原研究的报道，更无蛙病毒疫苗的研制报告。国外仅局限于蛙病毒病原的研究，尚未见有蛙病毒疫苗的文献报道。

近年来，我们在国内发现了一种称之为“蛙的病毒性致死综合症”疾病。对蛙的危害极大，发病主要出现在刚刚变态之后的幼蛙，其症状及发病特点是精神不振，行动迟缓，食欲减退。发病初期，蛙的体表出现出血点，蛙头背部皮肤开始仅局部脱落腐烂，很快烂斑扩大，病势不断加重，有的指部及趾部充血、出血或溃烂。病重的蛙体形非常消瘦，解剖发现肠壁严重充血，肠内无食物，有的肝或胆囊肿大。此病病程短、漫延极快，死亡率可高达100％。

本发明的目的在于研制出高效、稳定、安全的蛙用病毒疫苗，以防治通过其它药物难以奏效的蛙病毒性致死综合症疾病的传播和流行。

对蛙病毒感染的细胞超薄切片进行电镜观察，结果表明：病毒颗粒呈球形，有囊膜，大小约为150nm。病毒在感染的细胞内复制和增殖，有的病毒颗粒分散在细胞之中，也见有大量的病毒颗粒聚集在一起呈晶格状排列。根据对蛙病毒的核酸性质及基因组大小分析的结果，表明该病毒Wv₉₅₁₀属虹色病毒科蛙病毒属的成员。已保藏入中国典型培养物保藏中心(武汉)，保藏编号：CCTCC-V96004。

用粗提的蛙病毒悬液直接接种到长成单层的细胞上，可引起CO₉₅₁₀(草鱼性腺细胞)等细胞产生病变。在不同温度下细胞产生病变所需的时间以及病毒的TCID₅₀不同，蛙病毒的滴度随培养温度升高而增加，当温度相同时，不同的细胞对蛙病毒的敏感性亦不同。蛙病毒的回归感染试验结果及免疫保护试验结果分别见表1和见表2。

       表1、蛙病毒的回接感染试验结果

    组1(对照：注射生理盐水)    组2(试验：注射病毒)注射蛙总数(只)      20                   40注射一周死亡蛙数    0                    23注射二周死亡蛙总数  0                    40注射三周死亡蛙总数  0                    40共计蛙的死亡率      0％                  100％

由表1可见该病毒对蛙有很强的致死作用。在注射了病毒两周内，试验组蛙的死亡率就达到100％；而注射生理盐水对照组的蛙则全部正常。