[发明专利]治阴道病的乳杆菌及制剂

说明书

本发明涉及用于治疗阴道炎的德氏乳杆菌乳酸亚种的乳杆菌和含有该菌株活菌的外用微生态制剂。

近年来，随着微生态学的发展，微生物菌体制剂的开发和其在临床医学中的利用，已报导的微生态制剂，包括利用乳酸杆菌、双歧杆菌等用于防治肠道治病菌群过渡繁殖引起疾病的制剂，已在临床应用中显示出良好的效果(康白：正常菌群在仿制肠道传染病中的意义，中国微生态学杂志1989年康白论文集专刊p28-30)。对于治疗阴道病还是使用抗生素，抗生素不但杀死有害致病菌，也杀死有利健康的菌损坏人体的微生态及健康。用过抗生素后，细菌性阴道病易复发，更易引起外界治病菌的感染。长期使用抗生素，致病菌易产生抗药性。美国的性传染疾病杂志1992；19(3)：第146-148页报导的乳杆菌对细菌性阴道病的治疗，是利用冻干的嗜酸乳杆菌按双盲动法，对照组使用安慰剂，对60例细菌性阴道病进行治疗，观察其疗效。28例用药组中，16例阴道涂片恢复正常，而用安慰剂的对照组29例病人的阴道涂片均未恢复。但是，其治愈率只有56％，而且嗜酸乳杆菌在阴道的粘附定植性差，用药后复发率较高，复发率在81％。其所用的菌对白色念球菌无拮抗作用。

本发明的目的是提供一种生长旺盛、遗传稳定、产酸量较高、在阴道的粘附定植性好，最好需氧条件下生长良好，用于治疗阴道病，特别是细菌性阴道病的新乳杆菌菌株，进而提供治疗细菌阴道病的乳杆菌制剂。

针对本发明的目的，进行了健康人阴道乳杆菌属的分析、患有阴道病者阴道微生物群的分析，特别是细菌性阴道病阴道微生物的分析。结果表明阴道病及细菌性阴道病病人的阴道乳杆菌的平均浓度明显低于健康人，而肠杆菌、葡萄球菌、棒状杆菌、类杆菌属、支原体却明显增多，菌群失调是细菌性阴道病发病的原因。

本发明用于治疗细菌性阴道病的乳杆菌DM8908菌株，经中国科学院微生物研究所确定为德氏乳杆菌乳酸亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.lactis)。这株德氏乳杆菌乳酸亚种的乳杆菌DM8909是申请人于1996年11月4日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为CGMCC NO.0277的乳杆菌菌株。该菌具有产乳酸高和产过氧化氢，杀死有害治病菌，而且具有很好的在阴道上皮细胞粘附定植优势，抑制有害治病菌的生长繁殖，是很好的调节阴道菌群平衡、拮抗外侵菌生长的乳杆菌。其具有遗传的稳定性，经测定和动物试验其无毒、无副作用。乳杆菌DM8909主要对苦杏仁、乳糖、蔗糖产酸，对蜜二糖不产酸，DNA的G+C含量测定为49.12％，而且不含质粒。该菌株的其他生物特性为：

1、形态和染色：革兰氏阳性，直杆菌，喳状排列或不规则，无芽苞、鞭毛、荚膜。

2、培养特性：为兼性厌氧菌，传代后需氧培养生长良好，35℃-42℃均能够生长，最佳温度37℃，pH值3.0-8.0，最佳pH6.0。

3、生化反应：葡萄糖 甘露糖 果糖 半乳糖 蔗糖 麦糖 纤维糖 乳糖 棉糖 甘露醇 山梨醇 七叶灵  +      +     +     +     ±        +     +     ±         +     -      -      +苦杏仁  木糖  鼠李糖  阿拉伯糖  +       -     -        -

乳杆菌DM8909菌对灭滴灵、碳胺甲基异恶唑、头孢甲氧霉素耐药；对麦迪霉素、先锋霉素、庆大霉素、妥布霉素、青霉素、氨卞、链霉素、红霉素、洁霉素、先锋5号、卡那霉素、新霉素、四环素、痢特灵、氯霉素高度敏感；对多粘菌素、羧苄青霉素、丁胺卡那霉素中度敏感。乳杆菌DM8909菌对酸耐性强，在pH2.5、8.0均可存活。乳杆菌DM8909菌在液体中50℃条件下30分钟可存活，但60℃时10分钟即被灭活，在干燥粉末中60℃条件下30分钟仍可存活。乳杆菌DM8909菌株自1989年分离以来已传代50次和传代72代都未发现变异菌株，遗传稳定，至今仍未发现变异菌株。乳杆菌DM8909菌种有斜面、半固体和冻干三种保存方式。斜面及半固体每月传代一次，冻干保存每年复苏一次。在Lbs(lc)液体培养基中，37℃培养，活菌数在试管内36小时可达到高峰，48小时并不增加，72小时开始下降。