[发明专利]人肿瘤坏死因子δ和ε

说明书

本发明部分涉及新鉴定的多核苷酸和多肽，所述多核苷酸和多肽的变体和衍生物，制备所述多核苷酸和多肽及其变体和衍生物的方法，所述多肽的兴奋剂和拮抗剂，以及所述多核苷酸、多肽、变体、衍生物、兴奋剂和拮抗剂的应用。具体地，在这些方面及其他方面，本发明涉及人肿瘤坏死因子δ和ε，以下有时称作“TNFδ”和“TNFε”。

背景技术

人肿瘤坏死因子α(TNF-α)和β(TNF-β或淋巴细胞毒素)是一大类多肽介体的相关成员，这些多肽介体包括干扰素、白介素和生长因子，总称为细胞因子(Beutler,B.And Cerami,A.,Annu.Rev.Immunol.,7:625-655,1989)。

最初肿瘤坏死因子(TNF-α和TNF-β)是由于其抗肿瘤活性而发现的。然而，现在它被看作是一个具有多种活性的多效性细胞因子，这些活性包括某些转化细胞系的细胞编程性死亡，细胞活化和增殖的介导以及在免疫调节和炎症中起重要作用。

至今，有9种已知的TNF配体超家族成员，TNF-α、TNF-β(淋巴细胞毒素α)、LT-β、OX40L、FASL、CD30L、CD27L、CD40L和4-1BBL。所述的TNF配体超家族的配体是酸性的类似TNF的分子，其在胞外功能域中约有20％序列同源性(范围：12％-36％)并主要以膜结合形式存在，生物学活性形式是三聚体/多聚体复合物。TNF配体超家族的可溶形式目前仅鉴定出TNF、LTα和FASL(综述见Gruss,H.And Dower,S.K.,Blood,85(12):3378-3404(1995)，该文引入本文作参考)。

这些蛋白质参与细胞增殖、活化和分化的调节，如通过细胞编程性死亡或细胞毒性控制细胞存活或死亡(Armitage,R.J.,Curr.Opin.Immunol.,6:407(1994)和Smith,C.A.,Cell,75:959,1994)。

TNF可由许多细胞类型、包括单核细胞、成纤维细胞、T细胞、天然杀伤细胞(NK)并主要由激活的巨噬细胞产生。已经有人报道TNF-α在肿瘤的快速坏死、免疫刺激、自身免疫疾病、移植排斥、抵抗寄生虫、产生抗病毒应答、败血休克、生长调节、血管内皮效应和代谢效应中起作用。TNF-α还激发内皮细胞分泌各种因子，包括PAI-1、IL-1、GM-CSF和IL-6来促进细胞增殖。另外，TNF-α正调节各种细胞粘附分子如E-选择因子、ICAM-1和VCAM-1。

诱导由TNF配体超家族成员介导的各种细胞应答的第一步是它们与特异性细胞表面受体结合。TNF受体超家族含有10个目前已知的膜蛋白和编码TNFR相关分子的几个病毒开放读框。p75低亲和神经生长因子(NGF)受体是这一家族中第一个克隆到的受体(Johnson,D．等，细胞，47:545(1986))。后来克隆到两个TNF特异性受体，显示出它们与NGF受体相关(Loetscher,H．等，细胞，61:351(1990))。近几年来已建立了一个新的Ⅰ型转膜TNF受体超家族，这一家族包括p75神经生长因子受体，p60TNFR-Ⅰ,p80TNFR-Ⅱ,TNFR-RP/TNFR-Ⅲ,CD27,CD30,CD40,4-1BB,OX40和FAS/APO-1。另外，已鉴定了几种编码可溶TNF受体的病毒开放读框，如兔纤维瘤病毒中的SFV-T2(Smith,C.A.等，生物化学生物物理研究通讯，176:335,1991)和痘苗病毒中的Va53或SaIF19R(Howard,S.T.，病毒学，180:633,1991)。这些受体的特征在于在胞外(氨基末端)功能域有多个富半胱氨酸功能域，它们参与配体结合。人家族成员间的富半胱氨酸胞外区的平均同源性为25-30％。

很明显，目前需要调节正常和异常细胞的活化和分化的因子，因此也需要鉴定这种调节正常和病态细胞活化和分化的因子。特别是需要分离和鉴定控制转化细胞系的细胞编程性死亡、介导细胞活化和增殖并且作为免疫调节和炎症应答的初级介导物起作用的、以及在预防、消灭或校正机能失调或疾病中起作用的与TNF配体超家族同族的其他TNF配体。

发明概述

因此，本发明的一个目的是提供新的多肽，称为新的TNFδ和TNFε，根据图1和图2的氨基酸序列与肿瘤坏死因子家族其他蛋白如人TNFα和TNFβ的已知氨基酸序列之间的同源性，本发明的多肽已被推断鉴定为肿瘤坏死因子配体。

根据结构和生物学的相似性，已经鉴定本发明的多肽是TNF配体超家族的一个新成员。

本发明的另一个目的是提供编码TNFδ和TNFε的多核苷酸，特别是编码本文称作TNFδ和TNFε的多肽的多核苷酸。