[发明专利]淀粉酶变体

权利要求书

1.一种亲本α-淀粉酶的变体，该亲本α-淀粉酶：(i)具有选自分别在SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.7中所示的氨基酸序列的氨基酸序列；或(ii)和这些氨基酸序列中的一种或多种显示出至少80％的同源性；和/或显示出与由抗具有这些氨基酸序列之一的α-淀粉酶产生的抗体的免疫交叉反应性；和/或由与编码具有这些氨基酸序列之一的α-淀粉酶之DNA序列相同的探针杂交的DNA序列编码；在这种变体中：

(a)至少一种所说的亲α-淀粉酶的氨基酸残基已被缺失；和/或

(b)至少一种所说的亲本α-淀粉酶的氨基酸残基已被一种不同的氨基酸残基取代；和/或

(c)相对亲本α-淀粉酶而言至少有一种氨基酸残基已被插入；

所说的变体具有α-淀粉酶活性并且相对于亲本α-淀粉酶表现出至少一种下列性质：增加的热稳定性；增加的氧化稳定性；降低的Ca²⁺依赖性；

其条件是所说的变体的氨基酸序列不与分别在SEQ ID No.1、SEQ IDNo.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.7中所示的氨基酸序列之任一相同。

2.按照权利要求1的变体，其中至少一种所说的亲本α-淀粉酶的可氧化的氨基酸残基已被缺失或已被不同的氨基酸残基取代，后者对氧化不如所说的可氧化的氨基酸残基敏感。

3.按照权利要求2的变体，其中所说的可氧化的氨基酸残基选自由甲硫氨酸、色氨酸、半胱氨酸和酪氨酸组成的组。

4.按照权利要求2或3的变体，其中所说的可氧化的氨基酸残基是甲硫氨酸，该甲硫氨酸是或等同于在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列的M9、M10、M105、M202、M208、M261、M309、M382、M430或M440。

5.按照权利要求4的变体，该变体包含甲硫氨酸取代，此甲硫氨酸取代是或等同于在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列的下列取代之一：M9L；M10L；M105L；M202L、T、F、I、V；M208L；M261L；M309L；M382L；M430L；M440L。

6.按照权利要求3-5任一之变体，其中一种所说的甲硫氨酸残基已被苏氨酸取代。

7.根据以上权利要求任一之变体，其中至少一种氨基酸已被缺失，该氨基酸是或等同于在SEQ ID N0.1中所示的氨基酸序列的F180、R181、G182、T183、G184或K185。

8.按照权利要求7的变体，其中所说的缺失的氨基酸是或等同于所说的氨基酸残基中的任何两个。

9.按照权利要求8的变体，其中所说的缺失是或等同于R181*+G182*或T183*+G184*

10.根据以上权利要求任一之变体，该变体包含氨基酸取代，此取代是或等同于在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列中的下列取代之一：K269R；P260E；R124P；M105F、I、L、V；M208F、W、Y；L2171；V206I、L、F。

11.按照以上权利要求任一之变体，该变体包含氨基酸取代，此取代是或等同于在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列中的下列取代之一：Y243F、K108R、K179R、K239R、K242R、K269R、D163N、D188N、D192N、D199N、D205N、D207N、D209N、E190Q、E194Q、N106D。

12.一种包含编码按照权利要求1-11任一之α-淀粉酶变体的DNA序列的DNA构建体。

13.一种携带按照权利要求12的DNA构建体的重组表达载体。

14.一种用按照权利要求12的DNA构建体或按照权利要求13的载体转化的细胞。

15.按照权利要求14的细胞，该细胞是微生物。

16.按照权利要求15的细胞，该细胞是细菌或真菌。