[发明专利]制备异多聚体多肽的方法

权利要求书

1.一种制备异多聚体的方法，其特征在于，该异多聚体包括在界面处相接触的第一多肽和第二多肽，其中第一多肽的界面上含有突起，该突起可置于第二多肽界面上的空穴中，该方法包括：

(a)培养含有编码第一多肽和第二多肽的核酸的宿主细胞，其中编码第一多肽的核酸已从最初的核酸被改变从而编码突起，或者编码第二多肽的核酸已从最初的核酸被改变从而编码空穴，或两者都改变，而且该培养使核酸被表达；

(b)从宿主细胞培养物中回收异多聚体。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，编码第一多肽的核酸已从最初的核酸被改变从而编码突起，而且编码第二多肽的核酸已从最初的核酸被改变从而编码空穴。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(a)之前有一步骤：编码第一多肽界面上原始残基的核酸，被编码侧链体积大于原始残基侧链体积的引入残基的核酸所替换。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，该引入残基是精氨酸(R)。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，该引入残基是苯丙氨酸(F)。

6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，该引入残基是酪氨酸(Y)。

7.如权利要求3所述的方法，其特征在于，该引入残基是色氨酸(W)。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(a)之前有一步骤：编码第二多肽界面上原始残基的核酸，被编码侧链体积小于原始残基侧链体积的引入残基的核酸所替换。    

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，该引入残基不是半胱氨酸(C)。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，该引入残基是丙氨酸(A)。

11.如权利要求8所述的方法，其特征在于，该引入残基是丝氨酸(S)。

12.如权利要求8所述的方法，其特征在于，该引入残基是苏氨酸(T)。

13.如权利要求8所述的方法，其特征在于，该引入残基是缬氨酸(V)。

14.如权利要求1所述的方法，其特征在于，第一多肽和第二多肽都含有抗体恒定区。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，抗体恒定区是C_H3区。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，该抗体恒定区来自IgG。

17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，该IgG是人IgG₁。

18.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该异多聚体是双特异性抗体。

19.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该异多聚体是双特异性免疫粘附素。

20.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该异多聚体是抗体-免疫粘附素嵌合体。

21.如权利要求3所述的方法，其特征在于，第一多肽中的一个原始残基被引入残基所替换。

22.如权利要求8所述的方法，其特征在于，第二多肽中的一个原始残基被引入残基所替换。

23.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(a)之前有一步骤：将编码第一多肽和第二多肽的核酸引入宿主细胞。

24.用权利要求1所述的方法制备的异多聚体。

25.一种异多聚体，其特征在于，它包括在界面处相接触的第一多肽和第二多肽，其中第一多肽的界面上含有突起，该突起可置于第二多肽界面上的空穴中，其中该突起、空穴或两者被分别引入第一多肽和第二多肽的界面。

26.如权利要求25所述的异多聚体，其特征在于，该突起和空穴已被分别引入第一多肽和第二多肽的界面。

27.如权利要求26所述的异多聚体，其特征在于，该突起和空穴各包括天然存在的氨基酸残基。

28.一种组合物，其特征在于，它含有权利要求25所述的异多聚体和药学上可接受的载体。