[发明专利]抗支原体的抗原组合物

说明书

本发明涉及保护性和诊断性抗原，其制备方法，和它们在形成疫苗组合物中的应用，尤其是抗猪肺炎支原体(MycoplasmaHyopneumoniae)感染的疫苗组合物。

猪肺炎支原体是一种导致猪支原体肺炎(猪地方性肺炎)的普遍存在的猪呼吸病原体。猪地方性肺炎可能是世界上产猪国最广泛和经济意义最大的疾病。猪地方性肺炎(SEP)的经济影响复杂，并且疾病的代价惨重。在澳大利亚，估计1988年由于该疾病损失每年约20,000,000美元。死亡率增加、体重增长减少、食物转化降低、对次级细菌感染的易感性、管理费用增加，和抗生素使用增加是SEP经济影响的主要原因。

尽管制备了几种实验性疫苗，但这些均未产生最佳效果，且使用各种抗生素如四环素、林可霉素(lincamycin)和硫姆林仍然是最广泛的控制疗法。然而，这些抗生素只有有限的治疗作用，因为它们没有预防感染的形成，且治疗结束后会产生肺部损伤。

ML Technology Ventures L.P.的欧洲专利申请359 919描述了36kD、41kD、74.5kD和96kD大小的一系列抗原，并且提议在疫苗中使用这些抗原。所给的结果表明在猪中获得了一定抗感染的保护。

然而，本领域仍需一种有效的抗猪肺炎支原体的疫苗，它提供对抗猪肺炎支原体攻击后支原体定居繁殖(colonisation)及临床疾病的保护且也显著降低二次感染的发病率和死亡率。

因此，本发明的目的是克服，或至少减轻背景技术中一个或更多个因难及缺陷。

因此，在本发明的第一个方面提供了抗支原体的推断性保护抗原，优选为抗猪肺炎支原体，该抗原通过下面方法制备，包括

提供

支原体样品；

通过下面方法生产的包括至少一种抗支原体抗体的抗体探针，该方法包括：

提供以支原体或从感染位点或病灶区域或者靠近感染位点或病灶区域获取的支原体提取物攻击免疫动物后短时间采集的生物学样品；

从生物学样品中分离细胞；

在适当培养基中体外培养细胞；且

收获由所述细胞产生的抗体；

以抗体探针检测支原体样品以检测出至少一种抗原；和

分离检测到的抗原。

保护性抗原也可用作下面讨论的诊断抗原。

因此，在本发明的一个优选方面提供了选自如下文所述的具有大约110-114、90-94、72-75、60-64、52-54和46-48千道尔顿(kD)分子量的抗原的抗猪肺炎支原体或相关感染的推断性保护抗原，其突变体、衍生物及其片段。推断的保护性抗原可以是一种表面蛋白。推断的保护性抗原可以是表面脂蛋白或膜蛋白。

优选的保护性抗原选自具有大约110-114、90-94、74、62、52和48kD分子量的抗原组。

优选地是，72-75kD抗原包括下面的N-末端氨基酸序列：

AGXLQKNSLLEEVWYLAL以及，任选地，一个或更多个下面的内部氨基酸序列：

AKNFDFAPSIQGYKKIAHEL

NLKPEQILQLLG

LLKAEXNKXIEEINTXLDN

优选地60-64kD抗原包括一个下面的N-末端氨基酸序列：

MKLAKLLKGFX(N/L)(M/V)IK

ADP(F/I)(R/E)Y(V/A)PQG(Q/A)X(M/N)VG

优选地，52-54kD抗原包括下面的N-末端氨基酸序列：

AGXWAKETTKEEKS以及，任选地，一个或更多个下面的内部氨基酸序列：

AWVTADGTVN

AIVTADGTVNDNKPNQWVRKY

优选地，46-48kD抗原包括下面的N-末端氨基酸序列：

AGXGQTESGSTSDSKPQAETLKHKV以及，任选地，一个或更多个下面的内部氨基酸序列：

TIYKPDKVLGKVAVEVLRVLIAKKNKASR

AEQAITKLKLEGFDTQ

KNSQNKIIDLSPEG