[发明专利]分离和纯化细胞壁脂类成分的方法

说明书

发明背景

本发明涉及源自细菌的细胞壁脂类成分的分离和纯化，这些细菌隶属于分支杆菌属(Mycobacterium)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、诺卡氏菌属(Nocardia)或红球菌属(Rhodococcus)，其中最普遍存在的且从人类健康角度而言也是最重要的为分支杆菌属。

分支杆菌属包括大量的死物寄生菌种并且也是致病菌种。该属中最为人熟知的成员结核分支杆菌(M.tuberculosis)和麻风分支杆菌(M.leprae)分别是引发结核病和麻风病的起因，这两种病均属于发生于人类的最严重的疾病。结核病：现状

结核病被认为是世界上大多数地区的主要传染病。虽然在医学科学取得了很大进展以及一系列有效药物的出现，它们有时会使人产生这种疾病已被征服的印象，且虽然进行了有组织的国际性的努力，结核病仍是一个存在许多难解部分的世界性健康问题：大约有1/3的世界人口被结核分支杆菌感染(Fouci，1995)，据报道仅在1990年在世界范围内就有8百多万新的感染病例且有3百多万人死亡(Snider，1994)。世界健康组织(the World Health Organisation)所做的预测表明，到2000年每年将有升至102,000,000新的病例且有35,000,000人死亡，亚洲及撒哈拉附近(sub-Saharan)的非洲是感染最多的洲(De Cock等，1992；Dolin，Raviglione和Kochi，1994；Raviglione，Snider和Kochi，1995；Wilkinson和de Cock，1996)。根据最近发布的“WHO关于结核病流行情况的报告，1995(WHO Report on theTuberculosis Epidemic，1995)”，预测下一十年的数字更加令人惊骇：300,000,000新的感染例，30,000,000人死亡(Holler，1995)。实际上，WHO于1993年就指出结核病是全球性危害公众健康的急症(Bloomfield，1995；Wilkinson和de Cock，1996)。

结核病这种惊人的重现及毫不减弱的蔓延现象的主要原因可归结如下：

1)基于使用BCG^*)的世界性范围预防接种计划不能提供足够的保护作用

^*)BCG：(卡介菌(Bacillus of Calmette and Guerin))Calmette和Guerin将一株牛分支杆菌(M.bovis)在13年期间通过含甘油和牛胆(oxbile)的介质231次而使它减毒，

2)与结核病检测有关的问题

3)与结核病治疗及结核分支杆菌多种抗药性株的出现有关的问题

4)与HIV感染相互作用

5)社会-经济方面

1.基于BCG的世界范围预防接种计划不能提供足够的保护作用

通过诱导对结构分支杆菌感染的抵抗作用来防止结核病传播的努力起始于本世纪初，即利用BCG进行预防接种。根据大量的对照研究，证实了用BCG进行预防接种所获得的保护性功效在0至80％之间不等(Snider，1994；Hershfield，1995)，根据出版文献的分析，发现BCG预防接种约50％有效(Colditz等，1994；O′Brien，1995)。针对这种不令人满意的情况已提出许多假设/解释(Fine，1994)。最重要的是：

i)BCG疫苗间的变化，这是由菌株变异或生产过程中的差异所造成的；

ii)结核分支杆菌的致病机理的差异；

iii)暴露于环境分支杆菌时的区别-环境中的分支杆菌可以对BCG产生拮抗作用或协同作用；

iv)用BCG进行预防接种的人群间的遗传差异；

v)不同人群间营养状况及暴露于阳光下的时间不同；

vi)各种研究间设计方案的不同；

vii)用于评估以BCG进行预防接种的保护性作用的标准不恰当。

2.与结核病检测相关的问题

对于为战胜这些疾病而进行更为成功的全球性战略措施的实施而言，对结核病和相关的分支杆菌疾病的准确且适时的检测是重要需求之一。

传统的实验室检测方法有很大缺点，既不能区分活杆菌和死杆菌(快速而简单的Ziehl-Neelsen染色)，且如果这些方法证明有活杆菌(直接培养)存在，那么在实验室检测完成之前则需要数周时间。这样也就会延迟治疗的开始并且会导致疾病的进一步传播。