[发明专利]用于提取DNA的方法和装置无效
申请号: | 96194606.7 | 申请日: | 1996-06-11 |
公开(公告)号: | CN1187196A | 公开(公告)日: | 1998-07-08 |
发明(设计)人: | 蒂莫西·马丁·伊文斯;罗伯特·体·唐 | 申请(专利权)人: | 普罗金工业有限公司 |
主分类号: | C07H1/06 | 分类号: | C07H1/06;C07H1/08;C07H21/04;C12M3/06 |
代理公司: | 永新专利商标代理有限公司 | 代理人: | 林晓红 |
地址: | 澳大利亚*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 提取 dna 方法 装置 | ||
1.从细胞悬液提取DNA的方法,所述方法包括下列步骤:
1)将细胞悬液加到具有中空膜滤器的过滤装置中,
2)如果需要,过滤去掉悬浮所述细胞的培养基;
3)向所述细胞加入裂解溶液,保温所述细胞足够长的时间,以便释放DNA;和
4)过滤含有所述DNA的裂解溶液。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述DNA是基因组DNA。
3.根据权利要求1所述的方法,其中所述细胞悬液是培养的动物细胞。
4.根据权利要求1所述的方法,其中所述细胞悬液是选自于包括血液,淋巴液,精液和尿的体液。
5.根据权利要求1所述的方法,其中进一步包括洗涤在步骤(2)收集在中空纤维滤器上的细胞的步骤。
6.根据权利要求1所述的方法,其中所述裂解溶液包括离液剂的缓冲溶液。
7.根据权利要求6所述的方法,其中所述离液剂选自于盐酸胍,硫氰酸胍,碘化钠和高氯酸钠。
8.根据权利要求6所述的方法,其中所述裂解溶液进一步包括去污剂。
9.根据权利要求8所述的方法,其中所述去污剂选自于TweenTM20,TritonX-100TM,NonidetTM P-40,Brij58TM,脱氧胆酸钠,N-月桂酰肌氨酸。
10.根据权利要求9所述的方法,其中所述裂解溶液包括4M硫氰酸胍,0.1M乙酸钠(pH5.0),5%TritonX-100TM和3M脲。
11.根据权利要求1所述的方法,其中所述过滤裂解溶液的步骤是通过在所述装置的出口应用真空完成的。
12.根据权利要求1所述的方法,包括重复步骤(3)和(4)。
13.根据权利要求1所述的方法,其中所述细胞培养于所述细胞过滤装置。
14.根据权利要求13所述的方法,包括向所述装置中供应空气。
15.根据权利要求14所述的方法,其中所述空气通过所述中空膜滤器供应给所述培养物。
16.从细胞悬液提取DNA的方法,该方法包括下列步骤:
1)将细胞悬液加到具有中空膜滤器的过滤装置中;
2)如果需要,过滤去掉悬浮所述细胞的培养基;
3)向所述细胞加入裂解溶液,保温所述细胞足够长的时间,以便释放DNA;和
4)过滤含有所述DNA的裂解溶液;
5)将步骤(4)的滤液加入到离子交换介质中;
6)用第一溶液洗涤所述离子交换介质以将除DNA以外的物质洗脱;和
7)用第二溶液洗涤所述离子交换介质以洗脱所述DNA。
17.根据权利要求16所述的方法,其中所述离子交换介质是由二乙氨乙基,四级氨乙基或季铵基团取代的惰性基质。
18.根据权利要求16所述的方法,其中所述离子交换介质是二氧化硅。
19.根据权利要求16所述的方法,其中所述第一溶液是不溶解所述DNA的醇溶液。
20.根据权利要求16所述的方法,其中所述第二溶液是溶解所述DNA的水溶液。
21.根据权利要求16所述的方法,其中所述过滤装置直接结合到包括所述离子交换介质的装置上。
22.从微生物培养物提取质粒DNA的方法,该方法包括下列步骤:
1)将携带质粒的微生物培养物加到具有中空膜滤器的过滤装置中;
2)如果需要,过滤去掉培养基;
3)向所述微生物加入裂解溶液,保温所述微生物足够长的时间,以便释放质粒DNA;和
4)过滤含有所述质粒DNA的裂解溶液。
23.根据权利要求22所述的方法,其中所述微生物培养物是细菌培养物。
24.根据权利要求22所述的方法,其中所述微生物是在所述装置中培养的。
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