[发明专利]包含一种多糖抗原－载体蛋白共轭物和游离载体蛋白的疫苗

说明书

本发明涉及一种复合疫苗，该疫苗包括一种与载体蛋白相连接的共轭多糖抗原，其中载体蛋白在该疫苗组分中也可作为一种游离抗原。特别指出的是，本发明的疫苗指的是一种多价疫苗，即一种缓解或治疗多种疾病的疫苗。本发明也涉及到这种疫苗的生产及其在医学上的应用。

现有技术中已有一些使用多糖的疫苗，例如一种预防流感嗜血杆菌b(Hib)感染的疫苗，其基本组成是与载体蛋白共轭连结的荚膜多糖。载体蛋白主要为白喉或破伤风类毒素。人们已经提出一种抗肺炎双球菌的疫苗其基本组成是与载体蛋白(如破伤风或白喉类毒素)共轭的荚膜多糖。这种共轭疫苗抗原的实例已在US 4 365 170、US4 673 574、EP 208 375、EP 477508和EP 161 188中公开。

这种共轭疫苗和其它抗原或疫苗需要同时给药，这就是多重注射。多重注射带来的问题包括给药程序比较复杂和注射总剂量大。当为婴儿注射疫苗的时候，这尤其是一个严重的问题。

因此有人提出合成一种复合疫苗。众所周知的一种复合疫苗便是预防白喉、破伤风和B.百日咳菌感染的复合疫苗。这种疫苗包括一种百日咳组分(或者是已经杀死的全细胞B.百日咳或者是无细胞百日咳，其典型的组成是至少3种抗原-PT、FHA和69kDa)和白喉类毒素以及破伤风毒素。这种疫苗一般称作DTPw(全细胞)或DTPa(无细胞)。

在这种复合疫苗中需要再加入多糖共轭疫苗。然而我们已经发现如将各组分进行简单混合会降低多糖组分的抗体效价，也会降低对这种抗体效价的保持能力。因此，用TT-PRP共轭物与DTPa复合的复合疫苗进行免疫注射的婴儿与用TT-PRP共轭物和DTPa于不同部位发生伴随免疫的婴儿相比较，前者共轭PRP Hib多糖对去毒破伤风类毒素(TT)的致免疫性要降低。

在单价疫苗的情况下，也就是说，当疫苗只包括一种单一的与载体蛋白共轭的多糖时，共轭物中蛋白含量愈高，抗体对多糖的反应就愈强。一般认为这是因为T细胞依赖性多糖的特异性抗体反应的产生需要多糖与载体蛋白共价偶联。该载体蛋白需要一定的浓度(即PS相对于蛋白的比例)以便使TH细胞对载体容易产生反应，并且使得这种TH反应可以识别PS特异性B细胞克隆表达的肽链，它是由共价偶联的载体蛋白衍生而来的。

现有技术中的单价疫苗，其多糖与载体蛋白的比例一般为1∶3(重量∶重量)。

令人惊奇的是，与单价疫苗的情况完全不同，本发明人发现当多糖共轭物组分是多价疫苗(含游离形式的载体蛋白)的一部分时，该多糖组分的致免疫性可通过降低共轭抗原中的蛋白含量来提高。

因此，本发明提供了一种复合疫苗，包括一种与载体蛋白共轭的多糖抗原，并且其中载体蛋白也可作为游离抗原存在。其特征是多糖与载体蛋白的比例大约1∶0.3到1∶2，优选1∶0.5到1∶1.5，更具代表性的是1∶1。

多糖共轭物可通过一些已知的偶联技术来制备。例如，多糖可以通过一个硫醚键来偶联。该共轭方法依赖于多糖与1-氰基-4-二甲基氨吡啶鎓四氟硼酸盐(CDAP)相作用生成氰酸酯的活性。该活化的多糖因此而可以直接或通过一个间隔基与载体蛋白上的氨基进行偶联。优选氰酸酯与己烷二胺偶联并优选用氨基衍生的多糖与载体蛋白共轭(运用与硫醚键的形成有关的多重络合化学方法)。这种共轭物在Uniformed ServicesUniversity的PCT申请公开文本WO93/15760中作了描述。

这种共轭物也可以通过直接还原性胺化法来制备。如US4365170(Jennings)和4673574(Anderson)所描述的那样。其它方法在EP-O-161-188,EP-208375和EP-0-477508中有描述。

另一种方法是用已二酸酰肼(ADH)衍生的多糖经溴化氰活化后与载体蛋白在碳化二亚胺缩合作用下进行偶联(Chuc.等，《感染.免疫》(Infect.Immunity),1983 245-256)。

载体蛋白一般优选为破伤风(Tetanus)或白喉(Diphtheria)衍生的抗原，其中优选破伤风类毒素或白喉类毒素。该载体蛋白也可以是由博代杆菌(Bordetella)衍生而来的。该抗原典型的是一些白喉或破伤风毒素的无毒衍生物。

本发明中的疫苗组成最好含有一种合适的佐剂。