[发明专利]一种大规模纯化质粒的方法

权利要求书

1.一种从大规模的微生物细胞发酵物中大规模分离和纯化质粒DNA的方法，包括：

a)从大规模的发酵物中收获微生物细胞；

b)向收获的微生物细胞中加入足够量的裂解液；

c)在流通热交换器中，加热步骤b)的微生物细胞至温度70℃～100℃，以形成粗裂解物；

d)离心粗裂解物；

e)过滤和透滤步骤d)的上清，产生滤液；

f)步骤e)的滤液与阴离子交换基质接触；

g)从阴离子交换基质中洗脱和收集质粒DNA；

h)来自步骤g)的质粒DNA与反相高效液相层析基质接触；

i)从步骤h)的反相高效液相层析基质中洗脱和收集质粒；

j)任选地把步骤i)的产物浓缩和/或透滤到药学上可接受的载体中；以及

k)任选地灭菌DNA产物。

2.权利要求1的方法，其中步骤b)的裂解液是修改过的STET缓冲液。

3.权利要求1的方法，其中步骤c)加热至温度为70℃～77℃。

4.权利要求1的方法，其中步骤b)的裂解液含亚微克浓度的溶菌酶。

5.权利要求1的方法，任选地包括在步骤a)后任一步骤用RNA酶处理。

6.一种用权利要求1的方法获得的分离和纯化的质粒DNA。

7.权利要求6的质粒DNA，其中所述的质粒适合施用于人。

8.权利要求6的质粒DNA，其中所述的质粒适于施用给不包括人的动物。

9.权利要求6的质粒DNA，其中所述的质粒是一种多核苷酸疫苗。

10.一种适合施用于人的分离和纯化的质粒DNA。

11.权利要求10的质粒DNA，其中的质粒DNA是一种多核苷酸疫苗。