[发明专利]体内糖尿病检测

说明书

本发明涉及用自身反应性物质产生一种用于诊断影响免疫系统的细胞介导的疾病或细胞介导的疾病的体质的物质。

近年来，对诸如类风湿性关节炎和少年糖尿病(IDDM)这类自身免疫性疾病的产生过程中的分子关系的解释已有了迅速的进展，而且已经出现了对这类疾病的早期诊断和随后的治疗的具体的应用。

目前已经证实，在这类疾病的产生过程中，除了遗传的疾病体质外，环境因素也起了一定的作用。在遗传的危险因素方面，例如在IDDM中，只有MHC II型抗原的一些等位基因与这类疾病密切相关。因此可以通过分析这些等位基因而为IDDM定义一个易感人群(如参见Thomson等人，J.Hum.Genet.43(1988)，799-816或Todd等人，Nature 329(1987)，599-604)。

在IDDM产生过程中的环境因素可能是外源的免疫原性的活性肽序列。在这方面已经对病毒抗原进行了讨论，它们与内源性结构有部分同源性。在特殊情况下，尤其是在出生后的一段时间，通过食物而被吸收的抗原如牛血清白蛋白能够引起免疫反应，由于与内源性结构的同源性，这种反应会引起一个自身攻击性的过程。

在IDDM中的发病过程中，典型的现象就是由细胞毒性淋巴细胞引起的胰脏β细胞的逐渐破坏。这一过程远远早于葡萄糖代谢被破坏这一现象变得明显之时。当糖尿病的症状可被检测到时，80％以上的β细胞已经被破坏了。因此，在较早的时期在易感人群中检测到这些自身攻击性T细胞就显得十分地重要，这样就能够为被感染的人提供及时的治疗。

目前已经证实，在自身免疾性疾病中，内源性组织的破坏在开始时进行得十分缓慢。在这一过程的开始阶段，自身攻击性T细胞可能只识别一种或几种自身抗原。在Kaufman等人(Nature 368(1993)，69-72)和Tisch等人(Nature 368(1993)，72-78)的报道中，I型糖尿病的动物模型(NOD小鼠)显示，当这种小鼠自然发生糖尿病时，初始的T细胞介导的自身免疫反应是针对谷氨酸脱羧酶的。在该过程的初始阶段，在NOD小鼠体内只在谷氨酸脱羧酶(GAD)的C-末端识别1至2个表位。上面已经提到，葡萄糖代谢的改变在这一阶段还不能被检测到，而此时perinsulitis已经能够被检测到了。只有当疾病进一步发展时，通过自身攻击性T细胞来识别的GAD的肽的谱才能变得更宽。一旦糖尿病已经明显，也就可以检测到预先活化的T细胞，它们对抗其它的岛细胞抗原，例如外周蛋白、热激蛋白HSP65和羧肽酶H。

有证据表明，在人中针对GAD的免疫反应也与I型糖尿病的产生有因果关系。因此举例来说，在大约80％的前期糖尿病中可以检测到针对GAD的自身抗体，尽管人们估计这些自身抗体不是主要的病原。而且有人推测在I型糖尿病中T淋巴细胞对胰脏β-细胞有逐步破坏。已经有一些研究小组(Harrison等.，J.Clin.Invest.89(1992)，1161；Honeyman等.，J.Exp.Med.177，(1993)，535)检测到了针对GAD的上述T淋巴细胞。这些小组发现的T淋巴细胞与GAD 67kd分子的肽片段反应，该片断含有氨基酸208至404。

EP-A-0 519 469公开了得自人GAD 65kd分子的自身免疫反应多肽。这些多肽的氨基酸序列如下：

X-P-E-V-K-(T或E)-K-Z

其中X是从1至10个氨基酸中选出的一个任选序列，Z是从1至8个氨基酸中选出的一个任选序列。

欧洲专利申请号95 100 764.0中也提出了得自人GAD 65的自身反应肽序列以及一种含有这些肽的药物组合物。该申请还描述了使用这种药物组合物来产生一种物质，该物质被用来诊断影响免疫系统的疾病或疾病体质，或用来诊断肿瘤疾病或肿瘤疾病的体质。

本发明的目的之一是提供一种用于免疫系统的细胞介导的疾病，特别是自身免疫性疾病的诊断方法，该方法一方面尽可能地减少病人的不适感，另一方面能够进行快速和可靠的诊断。

该目的是通过用自身反应性物质产生一种用于诊断细胞介导的疾病或细胞介导的疾病的体质的物质实现的，其中该物质被皮内给药，诊断依据是在给药部位是否出现阳性反应。

本发明的诊断方法与目前市场上可得到的方法不同，目前使用的方法被用于细胞介导免疫的一般性检测，不同之处在于，这些检测使用了病人已经接触过的外源性抗原，例如纯化的蛋白质衍生物(PPD)、破伤风类毒素、念珠菌属(Candida)等。这些检测被用于确定被检测者的免疫系统的一般状态。免疫系统的细胞介导病没有被检测。