[发明专利]稳定的含TPO的冻干组合物

说明书

                    本发明背景

1.发明领域

本发明涉及一种含有TPO蛋白的组合物，更具体地讲，涉及一种稳定的含TPO的冻干组合物。

2.有关公开技术

人TPO(血小板生成素)是一种作为Mpl配体克隆的蛋白，其为细胞因子受体超家族的一员(de Sauvage等，Nature(London)，Vol.369，pp.533-565(1994)；Bartley，T.D.等，Cell，Vol.77，pp.1117-1124(1994))。在患有血小板减少症的动物(包括人、小鼠和犬)的血清和血浆中可检测到Mpl配体，它与巨核细胞和血小板生成之间的关系已被证实。

为了开发一种用于血小板减少症的治疗剂，本发明人已从血小板减少的大鼠的血浆中纯化了大鼠TPO，以能刺激大鼠骨髓中高度纯化的巨核细胞祖代细胞使之产生巨核细胞的活性为指示，而且，根据大鼠TPO的部分氨基酸顺序已成功地克隆了大鼠TPO cDNA和人TPOcDNA，从而通过重组DNA技术获得了大量的同源人TPO(H.Miyazaki等，Exp.Hematol.，Vol.22，p.838(1994))。由此成功获得的人TPO具有与上述作为人Mpl配体获得的因子相同的氨基酸顺序(见下述序列表的序列1)。

本发明人业已发现，本发明的TPO能有效治疗血小板减少症，因为当给患有血小板减少症的小鼠使用所述人TPO时，观察到血小板的减少受到抑制，血小板生成改善而增多血小板和造血机能得到改善，所述小鼠由于使用抗癌剂或免疫抑制剂或通过辐射或BMT诱发了骨髓抑制症状。

TPO是以极小的量使用，因为其活性高。即，通常根据症状、性别和服用途径，以0.05μg-1mg/kg体重至1mg/kg体重，优选0.5μg-50μg/kg体重的剂量，作为活性成分一般每日服用数次。因此，需要生产含有极少量TPO的药物制剂，提供可以完全阻止该活性成分活性降低的稳定的药物制剂。

本发明人对可长时间保存的稳定TPO蛋白组合物的开发进行了研究。结果发现，在TPO蛋白中加入一种可以药用的糖类，接着进行冷冻干燥，可以显著改善TPO蛋白的稳定性；除所述糖类外，再加入表面活性剂可以进一步有效改善含TPO的冻干组合物之稳定性，并且可以改善该含TPO的冻干组合物在重新配药时的溶解性、进一步加入氨基酸或蛋白可以更有效地改善含TPO的冻干组合物的稳定性。

                    本发明概述

按照本发明，提供一种含TPO的冻干组合物，其中含有TPO蛋白和可以药用的糖类，并选择性地含有至少一种选自表面活性剂、氨基酸和蛋白一类的可以药用的添加剂。

                      附图简介

图1表示当加入糖类(甘露糖醇、乳糖、蔗糖或麦芽糖)时TPO蛋白的稳定性图解，其中，残余TPO％被用作TPO稳定性的指标。

图2表示除所述糖类外再加入表面活性剂(多乙氧基醚20或多乙氧基醚80)时TPO蛋白的稳定性图解，其中，残余TPO％被用作TPO稳定性的指标。

图3表示除所述糖类和表面活性剂外再加入氨基酸(精氨酸或甘氨酸)或蛋白(明胶)时TPO蛋白的稳定性，其中，残余TPO％被用作TPO稳定性的指标。

                     本发明详细描述

作为本发明中使用的TPO，可以使用一种具有序列1所示氨基酸序列的蛋白。制备TPO的方法没有特别的限制，但TPO制品是高度纯化的蛋白。具有序列1所示氨基酸序列加以部分修饰(通过取代、缺失、插入和/或加成)的氨基酸序列的蛋白也可以采用，只要其保留TPO活性即可。

换句话说，也可以采用其氨基酸序列大体上与序列1所示氨基酸序列相同的蛋白。本文所说的“大体上与序列1所示氨基酸序列相同”是指“除序列1所示氨基酸序列外，也包括对序列1所示氨基酸序列进行部分取代、缺失、插入和/或加成而得到的氨基酸序列，只要其保留TPO活性即可”。

本发明人业已证实，即使序列1所示氨基酸序列的C-末端一侧的氨基酸残基缺失直到位置152残基，或其N-末端一侧的氨基酸残基缺失直到位置6，该人TPO仍能保持其活性。举例说明的数据如表1所示。

                      表1

  衍生物                          TPO活性

位置1-231                            +