[发明专利]变应原－XCD32融合蛋白

说明书

本发明涉及人类IgG和抗原/变应原(或抗原/变应原的组合体)的复合物。其有关抗-CD32分子和抗原/变应原(或抗原/变应原的组合体)之间的融合蛋白。变应原本文定义为特应性患者以过敏反应对其作出反应的抗原。本文所使用的抗原可以是各种来源的，例如环境变应原(如房间尘螨、桦树花粉、草花粉、猫抗原、蟑螂抗原)或食物变应原(如牛奶、花生、虾、大豆)或两者的组合体，或者非相关抗原(如牛血清白蛋白(BSA))。

变态反应是一种疾病，其中IgE抗体介导效应细胞(肥大细胞、嗜碱细胞、嗜曙红细胞)的活化，而且通过IgE的低和高亲和性受体(B细胞、单核细胞、树状细胞)增强抗原呈递。IgE的这些作用可以被特异性IgG抗体抵消，所述IgG抗体在效应和诱导细胞两者上与CD32(FcγRII)相互作用。因此，变态反应应该被认为是具有不平衡的Th1对Th2细胞的一种疾病。IgG抗体体内抵消IgE成功与否取决于特异性IgE超过特异性IgG的相对浓度，也取决于IgG的同型。所有人类同型对CD32具有低的亲和性，这可以由形成与变应原的复合物克服，但是许多变应原不形成足够大的使得可以稳定地结合到CD32上的与IgG分子的复合物。

迄今使用了利用变应原的活性接种的两种形式。最普遍的是所谓的“免疫疗法”，这依赖于用相对高浓度的变应原频繁免疫。这种技术仅仅在少数变应性疾病(如蜂刺变态反应)和鼻炎和结膜炎的某些病例中有一定的效果，前不久一些报道显示了在哮喘和特应性皮炎中的有效性。经典的皮下途径用于施用变应原，但是最近将这一途径与口头施用甚至局部施用进行了比较，结果总的来说是正的但是不一致。一种最新的免疫疗法，即所谓的Saint-Remy技术(参见例如EP 0 178 085和0 287 361)，其使用体外与相关的变应原复合的自身IgG抗体。这种方法使得可以使用低得多的量的变应原，具有更小的副作用。

两种疗法的机制不清楚。在经典方法中，虽然不是所有的特异性IgG的明显增加都与成功的免疫疗法有关，但疗法引起特异性IgG抗体增加时显得具有有益的作用。这一现象的一个可能的理由是IgG抗体对B细胞、单核细胞和肥大细胞上的CD32的比较低的亲和性。Saint-Remy法从病人选择特异性IgG抗体，随后体外将其与相关变应原混合。以这种方式，他们保证变应原不能与细胞或在细胞上的其它抗体同型(如在肥大细胞上的IgE)自由地进行反应。此外，抗个体基团型抗体可能是针对特异性IgG分子而产生的，随后将阻止变态反应，虽然这一点还没有由实验数据确认。

IgG分子在指导免疫反应针对单核细胞而非B细胞中是重要的。当一般性变应原-特异性IgG代替供体-特异性变应原-特异性IgG使用时，Saint-Remy法因此应该起作用。然而，Saint-Remy法的问题在于人类IgG抗体对其在B细胞上的Fcγ受体的低的亲和性，这与IgE相反，后者易于结合几乎所有的抗原-呈递细胞(包括B细胞)，导致散布变态反应和诱导Th2细胞。复合物的用途应该绕过低亲和性问题，因为与单个IgG分子比较复合物提高的抗体亲抗原性；然而，在复合物中的变应原/IgG的组合体也是不合乎需要的，因为结合人类IgG分子的变应原的表位的自然数不到5，太少以致不能增强复合物对受体的抗体亲抗原性。

采用本发明，经典的免疫疗法的风险因素被降低，并且在分离特异性IgG分子中所遇到的问题和这些IgG抗体对CD32的低亲和性问题得到解决。

IgE结合至肥大细胞和嗜碱细胞上引起组胺释放(当由抗原交联时)。此外，IgE能够提高人类B细胞的抗原呈递(图1)。此外，在不存在IgE时，B细胞是非常差的抗原-呈递细胞，除了很小部分的B细胞外，其是特异性抗原受体。可通过胞饮发生抗原摄取，但是这需要高的抗原浓度和/或长的培养时间。

图2显示，超过5天的变应原胞饮能够模仿IgE-介导的抗原呈递，但是IgG-介导的抗原呈递不引起T细胞的刺激作用。事实上，数据表明复合变应原和IgG阻止变应原呈递。

在另一系列实验中，研究了这些IgG-变应原复合物对IgE-介导的抗原呈递或变应原的胞饮摄取的作用。图3显示IgG复合物以剂量-依赖性方式抑制IgE-介导的抗原呈递，此外，在胞饮之后的抗原呈递受到抑制。这种作用不是抗原-特异性的(IgG/BSA复合物抑制Der P1-特异性刺激作用)，单体(非复合的)IgG不抑制抗原呈递。