[发明专利]胶体金免疫检测法

说明书

技术领域

本发明是关于对用于测定样品中靶物质是否存在或含量的胶体金免疫检测法的改进，特别是对用于体外诊断方面的胶体金免疫检测法的改进。

背景技术

借助胶体金免疫检测法测定抗原或抗体，是多年来就知道的方法。这种检测法的原理可简述如下。也就是，例如当靶物质是抗原时，将以能够识别这种抗原的抗体致敏的胶体金，即抗体致敏性胶体金，用于通常以紧密混合状态包含有抗原和杂质等的反应混合物，从而，该抗体致敏性胶体金能与此抗原发生特异性结合。由于这种结合反应形成了一种复合物，使含有此复合物的反应混合物，通过一种反应混合物可渗透性材料而经受类似层析展开的渗透作用，或者利用反应混合物的扩散渗虑现象，使含有复合物的反应混合物通过一种反应混合物可渗透性材料而经受过滤渗透作用，这样，可使含有抗体致敏性胶体金的反应混合物，其未与复合物反应，以及杂质等发生渗透性运动。

在运动路径的特定位置，将捕捉抗体予先固相化在反应混合物可渗透性材料上，进而，借助于捕捉抗体与抗原的特异性结合，并且其抗原识别位点不同于抗体致敏性胶体金的抗原识别位点，因此，只有该复合物被捕获在特定的位置，其余的成分将随同反应混合物被移去。根据在特定位置上复合物中胶体金的显色，可单独对抗原进行识别或测定。

另一方面，当靶物质是抗体时，能够识别该抗体的抗原所致敏的胶体金(抗原致敏性胶体金)，在含有该抗体的反应混合物中，也通过特异性结合与该抗体反应。在反应混合物中生成了复合物，随后，利用如上述检测中的穿透性渗透现象，使含有此复合物的反应混合物运动通过一种反应混合物可渗透性材料。借助在反应混合物可渗透性材料特定位置上予先固相化的捕捉抗体或捕捉抗原，以及通过它与复合物中抗原或抗体的特异性结合，只有来自含有复合物反应混合物的复合物能在特定的位置被捕获。根据在特定位置复合物中胶体金的显色，靶抗体可被单独识别或测定。

在这种胶体金免疫检测法中，一般是通过抗原-抗体反应进行特异性结合，并且可使用的胶体金通常是红色型或紫红色型。

作为介质，反应混合物通常含有水，缓冲液等，水中又含有生物成份。其中的水可部分地用惰性的水溶性有机溶剂如二甲基亚砜或二噁烷代替，目的在于促进靶物质在这样一种不干扰特异性结合反应的液态介质中的溶解。另外，还可加入惰性高分子物质，用于保护抗体或其它类似的成分，或者用于降低含胶体金反应混合物的介电常数。而且，为了促进反应混合物的扩散性渗透现象，还可以加入表面活性物质或其它类似物。

作为反应混合物可渗透性材料，可以使用对反应混合物具有渗透性的片状或层状材料。借助于扩散渗透作用，靶物质随同反应混合物一道运动，透过该材料中的间隙和微孔。这种材料构成至少是一片滤纸、棉花状、海绵状或多孔薄膜等的形式。在片状材料中通常使靶物质在同一平面(coplanar)方向运动，或者在层状材料中使之在厚度方向运动。

当在胶体金免疫检测法中的靶物质是抗原时，通常需使用针对此抗原的二种类型抗体，用于胶体金致敏而形成抗体致敏性胶体金的一种抗体，通常是单克隆抗体，而用另一种抗体(单克隆抗体或多克隆抗体)作为捕捉抗体，其抗原识别位点与抗体致敏性胶体金的不同。

下面将以用于人尿中人绒毛膜促性腺激素(hCG)检测的实例为基础，对胶体金免疫检测法作进一步的详述。例如，以一片滤纸用作反应混合物可渗透性材料。将用抗-hCG抗体致敏的胶体金(以胶体金颗粒标记的抗-hCG单克隆抗体)，以可再溶解(可再洗脱)的形式吸附在靠近滤纸的一端，而将抗原表位不同于上述单克隆抗体的抗-hCG多克隆抗体或单克隆抗体，以不可再溶解的形式固相化在靠近滤纸的另一端，作为捕捉抗体。

为了确定展开终点，如果有必要也可将针对上述抗-hCG单克隆抗体的某种抗体(例如，如果单克隆抗体是小鼠IgG，则可用抗小鼠IgG抗体)，固相化在从展开方向观察，比展开终点更远的位置。

检测是通过将含有靶物质的人尿施加于该滤纸片的一端来进行，然后借助于尿液的扩散性渗透现象，按照与纸层析相似的方式，使尿中所含的抗原如杂质随同尿液一道被展开至另一端。

通过展开，以抗-hCG单克隆抗体致敏并被吸附在靠近纸片一端的胶体金首先被洗脱进入尿液中。胶体金和尿中所含有的hCG形成hCG-抗hCG单克隆抗体致敏的胶体金复合物，它继续向另一端扩散。通过与固相化的捕捉抗体发生抗原-抗体反应，此复合物被捕获，这样，在捕捉抗体被固相化的位置，胶体金按照其固相化的式样(以斑点，符号，字母或其它类似的形式)显示出色调，从而指示尿中存在作为抗原的hCG。