[发明专利]肿瘤疫苗及其制备方法

说明书

基于肿瘤细胞的治疗用疫苗的开展主要是根据下列前提，在肿瘤细胞与正常细胞之间存在量或质的区别；免疫系统原则上具有识别上述区别的能力；通过用疫苗进行有效的特殊免疫作用，而可以刺激该免疫系统，并根据这种区别可以识别肿瘤细胞，由此，导致它们被推斥。

为了引起一个抗肿瘤应答，至少必须满足两个条件：第一，肿瘤细胞必须表达正常细胞中没有的抗原或新抗原决定基。第二，必须使免疫系统进行活化，以便对上述抗原进行反应。对肿瘤进行免疫治疗的一大难题是其低免疫原性，尤其是在人体中。就这点而言，令人惊奇的是，正如预料那样，在恶性细胞中的大量基因变化导致肽-新抗原决定基的形成，它可被细胞毒素的T-淋巴细胞的MHC-I-分子范围所识别。

最近，发现了与肿瘤有关的以及肿瘤特定的抗原，它们构成新抗原决定基，而且由此应构成被免疫系统袭击的潜在目标。然而，它对免疫系统在消除表达这些新抗原决定基的肿瘤中并没有成功，这明显地，不是由于新抗原决定基缺乏。而是由于对该新抗原决定基的免疫性应答不够。

为了对细胞基的癌进行免疫治疗，应该开展两个一般的策略：一方面所采用的免疫治疗，它是使用肿瘤反应性的T-淋巴细胞在体外扩张，并又重新引入病人中；另一方面是有效免疫治疗，它使用肿瘤细胞，以期待对肿瘤抗原形成新的或更强的免疫应答，导致系统性的肿瘤应答。

可以用各种不同方式制备基于有效免疫治疗的肿瘤疫苗，例如，辐照混有免疫刺激物助剂的肿瘤细胞，如小棒状杆菌属(Corynebacterium parvum)或菌Calmetle Guerin(BCG)以引起抗肿瘤抗原的免疫反应(Oettgen与Old，1991年)。

近几年来，尤其是采用了基因改性的肿瘤细胞，以便对癌症进行有效的免疫治疗。其中，引入到肿瘤细胞中的外来基因分成三个种类：

其中之一是使用基因改性的肿瘤细胞，以产生胞质分裂素。肿瘤细胞和胞质分裂素信号的局部重合，认为是有一种激起抗肿瘤免疫性的刺激物。应用这种策略的综述可参阅Pardoll，1993年，Zatloukal等人，1993年，及Dranoff与Mulligan，1995年。

具有为分泌细胞分裂素，如IL-2，GM-CSF或IFN-γ，或者为表达共-刺激的分子的改性的肿瘤细胞已在动物试验中表明，产生了有效的抗肿瘤免疫性(Dranoff等人，1993年；Zatloukal等人，1995年)。在具有明显肿瘤，而且已发展为对肿瘤产生耐受力的人中，要完全检测这一系列综合的交替作用，以便产生有效的抗肿瘤反应，是非常困难的。在人体上使用分泌细胞分裂素的肿瘤疫苗的实质效用，至今尚未被证实。

另一类用于改性肿瘤细胞以作为肿瘤疫苗使用的编码所谓的辅助蛋白，这种方法的目的在于，使肿瘤细胞转化为有抗原的细胞(新APCs)以便能直接产生肿瘤特定的T-淋巴细胞。这类方法的实例描述于Ostrand-Rosenberg，1994年。

肿瘤抗原(TAS)或由其衍生的肽的分离与识别，例如，已描述于Wolfel等人1994年a)与1994年b)；Garrel等人，1993年，Lehmann等人1989年，Tibbets等人，1993年，或国际专利申请文献Wo 92/20356，Wo 94/05304，Wo94/23031，Wo 95/00159。这些方法，对使用肿瘤抗原作为肿瘤疫苗的免疫原是必要的，该免疫原可以是以蛋白质形式，也可以肽形式存在。但是，上述的肿瘤抗原形式的肿瘤疫苗。对激起细胞的免疫应答仍是不足以致免疫性，免疫应答对清除带肿瘤抗原的肿瘤细胞是必要的，助剂的共同施用仅对加强免疫应答提供有限的可能性(Oettgen和Old，1991年)。

用于提高肿瘤疫苗效用的第三种有效免疫治疗策略是，基于异基因化(外来的)自体的肿瘤细胞。这种概念是基于免疫系统和表达一个外来蛋白的肿瘤细胞反应。并在这反应过程中，也引起了一个针对这些肿瘤抗原(TAs)的免疫应答，该免疫应答是由疫苗的肿瘤细胞呈现的。

Zatloukal等人，在1993年提出了这些不同方法的综述。其中，通过采用不同的基因，而使肿瘤细胞异化以便加强免疫原性。

三分子复合物在调节特定的免疫应答时起了重要作用，该三分子复合物是由T-细胞-抗原受体，MHC(主要组织相容性复合物)分子与其配位体所组成的，它是一个由肽片段衍生的蛋白质。