[发明专利]具有经非免疫原性肽连接在一起的干扰素α和免疫球蛋白Fc的杂合体

说明书

发明背景

干扰素-α(“IFNα”)是以重组DNA技术所产生的第一种细胞因子，且已示出在如发炎，病毒及恶性疾病等状况下具有治疗价值。许多种IFNα制剂，包括纯化自天然来源及由重组DNA技术所产生者已被应用，且于各种恶性及病毒疾病中被测试。IFNα可造成某些已发展肿瘤的消退，且在某些病毒感染中诱导阴性反应。目前为止，IFNα已于许多国家中被许可或试验于以下适应症：如卡波西氏肉瘤：发细胞白血病；恶性黑色素瘤；基础细胞癌；多发性骨髓瘤；肾细胞癌；B型肝炎；C型肝炎；花柳疣；I／II疱疹，水痘／输状疱疹及蕈样肉芽肿。

大多数的细胞因子，包括IFNα，由于于活体内产生以局部及暂时作用，因此有相当短的循环半衰期。IFNα的血清半衰期仅约2至8小时(Roche Labs．Refferon A，Schering Intron A，Physicians’DeskReference，47^thedition，1993，pp．2006-2008，2194-2201)。为运用IFNα作为有效的全身性治疗剂，其需以极大剂量且经常给药。例如，对AIDS-相关的卡波西氏肉瘤的建议疗程之一是始自每天3千6百万IU的诱导剂量历10至12周，以肌内或皮下注射方式给予，继以3千6百万IU的维持剂量，一周3次。(Roche Labs．Referon a，Physicians’Desk Reference，47th edition，1993，pp．2006-2008)。此种经常性肠外给药是不方便且令人疼痛的。再者可能由高剂量引起的毒性作用，为某些患者的难处所在。据报道有皮肤，神经学，内分泌及免疫毒性。为克服这些缺点，可修饰分子以增加其循环半衰期或改变药物的配方以延长其释出时间。剂量及给药频率可减少而仍增加其效力。据报，低于9百万单位的剂量，是可耐受的，而高于3千6百万单位的剂量常会诱生严重的毒性及显著地改变病人状况。(Quesada，J．R．et al．，J．Clin，Oncol．，4：234-43，1986)。经由产生新的IFNα也可能实质地减少毒性作用，该新的IFNα可在循环中更稳定且需更少剂量。目前已致力于制造滞留时间有所延长的重组IFNα-明胶缀合物(Tabata，Y．et al．，Cancer Res．51：5532-8，1991)。于动物中也已试验以脂质为基础的胶囊化IFNα配制物，并达到蛋白质在腹膜中延长的释放(Bonetti，A．and Kim，S．Cancer ChemotherPharmacol．33：258-261，1993)。

IgG及IgM类免疫球蛋白为人体血液中含量最丰富的一类。其循环半衰期由数天至21天。当用于形成重组杂合体时，发现IgG可增加许多配体结合蛋白质(受体)的半衰期，包括可溶性CD4分子，LHR及IFN-γ受体(Mordenti J．et al．，Nature，337：525-31，1989；Capon，D．J．and Lasky，LA．，美国专利5，116，964；Kurschner，C．et al．，J．Immunol．149：4096-4100，1992)。然而，此种杂合体出现难题，即在活性部份C-末端的肽，及在Fc部分N-末端的肽，在融合处会生成新的肽序列，其是一种新抗原，且具免疫原性。本发明涉及一种IFNα-Fc杂合体，其经过设计可克服此问题并延长IFNα的半衰期。

发明概述

本发明涉及由二个亚基组成的杂合体重组蛋白质。每个亚基包括一个人类干扰素，较好是IFNα，由一个肽接头连接，其主要由T细胞惰性序列所组成，连接至人类免疫球蛋白Fc片段上，较好是γ4链。γ4链优于γ1，因为前者的补体活化能力较少或无此能力。

IFNα的C-末端连接至Fc片段的N-末端。额外的IFNα(或其他细胞因子)可粘附至Fc片段其他任何未结合Fc链的N-末端上，产生γ4链的同二聚体。若所选择的Fc片段是另一链，如μ链，则由于Fc片段可与10个可能的结合位点形成五聚体，此可生成有干扰素或其他细胞因子在10个结合位点中的每一个上连接的分子。