[发明专利]编码11-顺式视黄醇脱氢酶的核酸分子

说明书

相关申请

本申请是1995年11月22日递交的流水号08/562,114的部分继续申请，08/562,114是1995年1月20日递交的流水号08/375,962的部分继续申请，08/375,962是1994年6月10日递交的共同待审申请流水号08/258,418的部分继续申请，所有这些申请都列入本文的参考文献。

发明领域

本发明涉及具有11-顺式视黄醇脱氢酶活性的蛋白质，该蛋白质与表达于例如视网膜色素上皮细胞(RPE)中的细胞质视黄醇-结合蛋白(RBP)的膜受体的特异性部分形成复合物，本发明更具体地涉及32KDa的具有11-顺式视黄醇脱氢酶活性的蛋白质，该蛋白质与63KDa的结合RBP的膜蛋白形成复合物。本发明还涉及32KDa蛋白质(p32)的分离，以及编码p32的核酸分子或与该编码序列互补的核酸分子，和这些物质的多种应用。

发明背景

Retinoid(维生素A-衍生物)在多种生物学过程中具有重要的生理学功能。在胚胎生长和发育过程中，以及在成年生物体的生长和分化过程中，retinoid行使激素的功能并参与调节多种细胞类型的基因表达，见Lied等人，Trends Genet.,17:427-433(1992)。据信这些作用是通过两类受核配体控制的转录因子介导的，它们是视黄酸受体(RAR)和retinoid X受体(RXR),Benbrook等人，自然，333:669-672(1988)；Brand等人，自然，332:850-853(1988)；Giguere等人，自然，330:624-629(1987)；Mangelsdorf等人，自然，345:224-229(1990)；Mangelsdorf等人，Genes Dev.6:329-344(1992)；Petkovich等人，自然，330:440-450(1987)；和Zelent等人，自然，339:714-717(1989)。

除了在细胞生长和分化中作为激素起作用以外，retinoid也参与视觉过程，这是因为视黄醛的立体异构体11-顺式视黄醛是视色素的生色团，例见Bridges,The Retinoids,vol.2,pp125-176,Academic Press,Orlando,Florida,(1984)。

在正常的生理状态下，大多数细胞(眼和非眼细胞)得到全反式视黄醇作为它们retinoid的主要来源。尽管不同的组织中发生着许多不同的代谢事件，但已知已逐渐形成了共用的视黄醇胞外转运机。具体地说，在细胞质中视黄醇由细胞质视黄醇结合蛋白(RBP)转运，见Goodman等人，The Retinoids,Academic Press,Orlando,Florida,vol.2,pp41-88(1984)，然后，通过使用特殊机制的细胞转变产生视黄醇的活性衍生物，即非眼组织中的视黄酸和对于眼组织而言，大多为11-顺式视黄醛。迄今为止，在分子水平上仍未完全确定任何一个这种机制，所涉及的几种酶也只是通过酶解活性得以鉴定，见Lion等人，Biochem.Biophys.Acta.384:283-292(1975)；Zimmermann等人，Exp.Eye Res.21:325-332(1975)；Zimmermann等人，Exp.Eye Res.23:159-164(1976)和Posch等人，生物化学，30:6224-6230(1991)。

关于retinoid的摄取，极化的视网膜色素上皮细胞(RPE)是独一无二的，因为全反式视黄醇通过两种不同的机制进入这些细胞。由RBP积累的视黄醇可通过碱性侧的质膜摄入，而可能由间质中的视黄醇结合蛋白(IRBP)在漂白视色素之后摄入的全反式视黄醇可通过顶端的质膜进入，见Bok等人，Exp.Eye Res.22:395-402(1976)；Alder等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.108:1601-1608(1982)；Lai等人，自然，298:848-849(1982)；和Inu等人，Vision Res.22:1457-1468(1982)。