[发明专利]修饰方法

说明书

本发明涉及一种修饰方法。

特别是，本发明涉及体内修饰方法。

半乳甘露聚糖是一类异源细胞壁多糖，它们由具有不同数目α-1-6连接的半乳糖侧链的β-1-4连接方式甘露聚糖主链组成。

最主要工业使用的半乳甘露聚糖得自豆类瓜尔豆(Cyamopsistetragonolobus)和长角豆(Ceratonia siliqua)的胚乳。这些半乳甘露聚糖的半乳糖含量不同，瓜尔豆半乳糖与甘露糖之比大约为1∶1.6，而长角豆树胶(LBG)的该比率大约为1∶34。

半乳糖含量的差异对瓜尔豆胶和LBG的功能性质具有显著影响。这两种半乳甘露聚糖低浓度(1-2％)下形成高粘度溶液，但LBG具有的另一性质是能够形成具有其它多糖(诸如吨胶、角叉菜胶和琼脂糖)的坚硬凝胶。食品工业将LBG广泛用于乳制品(主要是冰淇淋)、色拉调料、调味汁、低卡路里产品和宠物食品。然而，LBG的使用由于价格高和供应不规律而受限制。

因此，希望大规模生产诸如因为提高甘露糖与半乳糖之比(诸如类似于LBG)而具有改进功能性质的半乳甘露聚糖。

由于瓜尔豆胶和LBG之间种属化学的相似性，并且瓜尔豆胶的价格低得多，因此已经试图在体外将瓜尔豆胶转化为具有类LBG性质和具有类似于LBG相似化学组成的半乳甘露聚糖。

这样一种体外处理的实例包括使用α-半乳糖苷酶。在该方面，参见McCleary等1983和EP-A-0255153。

通过使用由瓜尔豆种子纯化的α-半乳糖苷酶，获得半乳糖含量为10-34％的瓜尔豆胶(Bulpin等1990)。改性瓜尔豆胶胶凝行为的分析表明，将凝胶与角叉菜胶混合形成的半乳糖含量为24％的制剂表现出的流变学性质与LBG相似。相比之下，未处理瓜尔豆胶的半乳糖含量为38％，LBG的半乳糖含量为23％。

然而，从工业观点来看，瓜尔豆胶的体外脱半乳糖基涉及许多问题。

首先，由于必须除去瓜尔豆胶中大约40％的半乳糖，因此必须制备大量的α-半乳糖苷酶。

第二，在保温期间，非常重要的是甘露聚糖主链不发生水解，必需使用高度纯化的α-半乳糖苷酶制剂，以避免任何微量的甘露聚糖酶活性。已经公布了从瓜尔豆胶种子异源生产α-半乳糖苷酶的方法(Overbeeke等1986)。然而，在研究对瓜尔豆胶作用之前，纯化来自测试物种生产的α-半乳糖苷酶，提示甘露聚糖酶的问题仍有待解决。

第三，半乳甘露聚糖的产量降低，因为半乳糖含量降低40％相当于减少大约15％的改性瓜尔豆胶。在成品中，释放的半乳糖可能是不希望有的，可能必须除去。

第四，在与α-半乳糖苷酶保温期间有相当大的半乳甘露聚糖解聚风险。

此外，有污染微生物在释放内源β-甘露聚糖酶的反应混合物上形成菌落的风险。

最后，必须从反应混合物中除去水。除该方法的费用外，也导致可以用来获得最适反应条件的缓冲液浓缩。

这些实例证明，修饰瓜尔豆胶的现行方法牵涉多个问题，其中一些与相当大的费用有关。

因此，需要改进的瓜尔豆胶修饰方法。

在该方面，我们现在认识到，如果利用重组DNA技术在植物(诸如瓜尔豆植株)体内修饰含甘露糖/半乳糖的化合物(诸如瓜尔豆胶)将是有益的。

因此，广义来讲，本发明涉及在能够合成该化合物的生物(或其部分)中含甘露糖/半乳糖化合物(诸如瓜尔豆胶)的体内修饰，其中该生物所用的方法对该生物为非天然的方法，诸如利用DNA技术的方法。发生的修饰可以与该化合物(例如甘露糖和/或半乳糖)的一个或多个前体有关，或与该化合物本身有关(即包含该化合物的一个化合物的甘露糖和/或半乳糖单元的修饰)。

特别是，本发明涉及一个体内修饰方法，它影响，最好是提高能够产生含甘露糖/半乳糖化合物的生物(或其部分)的甘露糖与半乳糖之比，或其含甘露糖/半乳糖化合物的甘露糖与半乳糖之比。该体内修饰方法不是天然产生的方法。

因此，使用本发明的体内修饰方法，可以改变生物体内内部甘露糖与半乳糖之比和/或其甘露糖/半乳糖化合物的甘露糖与半乳糖之比。