[发明专利]微生物同步发酵正十三烷生产十一烷1，11-二羧酸方法

说明书

本发明涉及微生物同步发酵正烷烃生产长链α，ω-二元酸的方法，尤其是发酵正十三烷(nC₁₃)高产十一烷1，11-二羧酸(DC₁₃)的方法。

C₁₀以上的长链二元酸是化工上合成高级香料，高级尼龙工程塑料，高档服装用尼龙热熔胶，高温电介质，高级涂料，润滑油添加剂和耐寒性增塑剂等的重要原料。尤其是十三碳二元酸(DC₁₃)和十五碳二元酸(DC₁₅)，它们分别是合成日用香料麝香T和名贵香料麝香酮的重要原料。

C₁₀以上的长链二元酸，在自然界中不单独存在，只有少数几种二元酸可从植物油中裂介制取，例如癸二酸(DC₁₀)可从蓖麻籽油裂介制取；DC₁₃可从菜籽油中抽提出甘油芥酸酯再用臭氧氧化方法生产；DC₁₅可从蒜头果油中的脑神经酸裂介制取。但它们都受农田和气候的限制，远不能满足需要。化工上至今也还没有经济可行的合成路线和方法。微生物学家应用生物工程技术，利用微生物发醇石油中的正构烷烃生产相应链长的二元酸，弥补了化工上的不足，开辟了长链二元酸的新来源。

七十年代以前，各国科学家对微生物发酵生产二元酸的研究，只处于理论研究阶段，所产生和积累的二元酸也都是十个碳以下的短链二元酸，七十年代以后，进入应用研究阶段，通过大量的菌种诱变筛选，培育出一批新突变菌株，能从十个碳以上的正烷烃产生和积累与基质链长相同的长链二元酸，并通过不断的培育和代射调控研究，使每升发酵液中二元酸的积累从开始时的几克，十几克，几十克提高到目前的一百多克和二百克左右。

八十年代以来，二元酸的研究进入小规模工业生产阶段，并出现了几个有实际生产价值的专利文献。中国专利87105445.0，CN1046757A，CN1092108A和CN1130685A分别提出生产长链α，ω-二元酸的方法，特别是分别高产DC₁₆，DC₁₇，DC₁₅和DC₁₂的方法。在16升目动控制罐中，发醇5天，DC₁₆为123g/L，发酵6天，DC₁₇为133g/L，在2.5m³通用式发酵罐中，发酵6天，DC₁₅为178g/L，在3m³发酵罐中，发酵5天，DC₁₂为145g/L。

对DC₁₃的研究，日本矿业株式会社率先工业放大，1984年建成年产200吨的DC₁₃的工业发酵装置，并投入生产。中国专利CN 1071951A提出一种微生物异步发酵生产长链α，ω-二元酸的方法，尤其是生产DC₁₃的方法。其方法是分两步进行，根据实验例4，第一步是把培养好的600升菌种液接入装有正十三烷(nC₁₃)125升和培养基1775升的3m³发酵罐内(即装液量为83％)，控制PH在4.5±0.1，繁殖培养菌体，24小时，菌体浓度达到8.7％(湿菌重)；第二步，补加20％(V/V)的nC₁₃，调PH至7.8±0.1，转入发酵产酸阶段，发酵72小时，DC₁₃达到98.2g/L，继续发酵72小时，产酸达到166.3g/L(从接种开始到发酵结束，共168小时)，转化率为84％。

本发明的目的是提出另一种利用微生物同步发酵正烷烃生产C₁₁-C₁₈长链α，ω-二元酸的方法，尤其是高产DC₁₃的方法。

本发明所用的菌株为热带假丝酵母(Candida tropicalis)P-12-242，是以一株氧化正烷烃生产混合二羧酸的热带假丝酵母(参见《微生物学报》20(1)：88-93，1980)为出发菌株，通过亚硝酸和紫外线的多次反复诱变筛选培育出来的，能从C₁₁-C₁₈的各种单一正烷烃和混合正烷烃，尤其是正十三烷，高产出地生产相应链长的二羧酸。热带假丝酵母P-12-242(以下简称P-12-242)保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC NO.0297。

P-12-242的生理特性如下：

一、糖类的发酵：葡萄糖+，半乳糖+，蔗糖+，麦芽糖+，乳糖-。