[发明专利]抗原－抗体－重组DNA复合型疫苗

权利要求书

1．一种复合型疫苗，其特征在于含有乙型肝炎病毒抗原、其相应抗体以及克隆有编码相同或不相同病毒蛋白基因的重组质粒DNA，质粒DNA与抗原量的比例为20-100∶1，抗原与抗体的比例通过下列方法确定：用不同稀释度的抗原与抗体做方阵式滴定，共同在37℃孵育0.5-2小时后置4℃作用12-20小时，经12,000转/分离心沉淀，ELISA测定上清液中抗原及抗体的吸光度均小于0.4后，为最适抗原与抗体比例管，吸去上清夜，在沉淀物中加入与第一次相同量的抗原。

2．根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于所述的乙型肝炎病毒抗原为乙型肝炎重组抗原或天然抗原。

3．根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于所述的相应抗体为重组或经免疫后制备的动物或人源抗体，或免疫球蛋白。

4．根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于所述的抗体为乙型肝炎病毒抗体。

5．根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于所述的重组质粒DNA含有真核细胞表达元件，同时含有编码相同或不相同病毒的蛋白基因的质粒DNA。

6．根据权利要求5所述的疫苗，其特征在于其中的重组质粒DNA为含有编码乙肝病毒蛋白基因的重组质粒DAN。

7．根据权利要求5所述疫苗，其特征在于其中的重组质粒DNA含有编码丙肝病毒蛋白基因的重组质粒DNA。

8．一种按权利要求1所述的复合型疫苗的制备方法，其特征在于采用下列步骤完成：

(1)用重组或血源纯化的肝炎病毒抗原，与重组或免疫获得的相应多克隆或单克隆抗体，用不同稀释度的抗原与抗体做方阵式滴定，共同在37℃孵育0.5-2小时后置4℃作用12-20小时，经12,000转/分离心沉淀，ELISA测定上清液中抗原及抗体的吸光度均小于0.4后，加入与第一次相同量的抗原，制成抗原-抗体复合物；

(2)用真核细胞表达载体质粒DNA，其中克隆有编码肝炎病毒蛋白基因，经转化细菌后，扩增、纯化、重组质粒DNA，按1ug抗原加入20-100ug的比例缓慢将重组质粒DNA加入抗原-抗体复合物中，制成复合型疫苗。

9．根据权利要求8所述的复合型疫苗制备方法，其特征在于其中抗原的稀释度为0.5-5微克/毫升，抗体ELISA效价为1∶1600-1∶12800。