[发明专利]一个与抗癌基因P53相作用的人类新基因P53BP3

说明书

本发明涉及与抗癌基因编码产物P53相作用的人类新基因P53BP3及它在人体各组织中的表达和在染色体上的定位，以探索肿瘤诊断和治疗的新途径。

P53是一种抗癌基因的编码产物，它可以广泛参与细胞周期、基因表达、DNA复制和修复、细胞分化和发育的调控、抑制肿瘤的形成和维持基因组的稳定等各项生理过程(Levine，A.J.，Cell，1997，88：323-331)。其核心环节就是DNA与蛋白质，蛋白质与蛋白质相互作用，其中P53与其它蛋白质因子之间的相互作用更加重要，已成为人们注意的焦点。过去几年来，人们已经克隆了许多编码产物能够与P53相作用的基因(Goga，A.and Liu，X.，Oncogene，1995，11：791-799；Walker，K.K.and Levine，A.J.Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1996，93：15335-15340；Wang，X.W.and Yeh，H.Nature genet，1995，10：188-193；Maheswaran，S.and Englert，A.J.Genes Der.1995，9：2143-2156；Horikoshi，N.and Vsheva，A.，Mol.Cell.Biol.1995，15：227-234.)，一方面研究这些因子的结构特征，寻找它们与P53的作用规律，另一方面致力于研究它们的功能。这两方面的研究为阐明P53参与细胞各项生理过程的调控机制奠定了基础。

正常的P53具有抗癌作用，其中P53介导的细胞凋亡过程是P53控制肿瘤发生的一种有效途径(Symonds，H.，et al.Cell，1994，78：703-711)，但是一些P53的突变体由于丧失了正常功能而导致细胞癌变，另一些P53的突变体本身即具有致癌功能。在50-55％的人类癌症中可以检测到P53基因的突变(Hollsteim，M.，Rice，K.et al.Nucleic Acid Res.1994，22：355l-3555)。研究P53与其他蛋白质因子的相互作用，有助于探讨肿瘤的发病机制，为肿瘤的诊断和治疗提供新的设想和方案。

酵母双杂交系统是近年来发展起来的一种在体内研究蛋白质之间相互作用的体系(Chien，C.T.et al.Proc.Acad.Sci.USA，1991，88：9578-9582)。该系统的原理是基于酵母中的一种转录因子GAL4功能的重建。GAL4分子含有两个相对独立的功能域：DNA结合区和转录激活区。把欲验证存在相互作用的两个蛋白质(X和Y)的基因分别以GAL4的DNA结合区和转录激活区融合，再将这两个融合表达载体转入特殊的酵母细胞中，此酵母菌的染色体上，已整合了可被GAL4 DNA结合区所识别并结合的位点及下游报告基因(HIS3或LacZ)，如果两个蛋白质之间发生相互作用，报告基因就能表达。蛋白质Y也可是一个基因文库，就可以从中筛选以蛋白质X相互作用的新蛋白质基因。

为此，本发明的目的是提供一种能与P53相作用的人类新基因P53BP3全长cDNA序列，并分析它在16种正常人组织和7种肿瘤细胞株的表达水平及在染色体上的定位。

本发明是一种与抗癌基因P53相作用的人类新基因P53BP3，它是根据以上情况，利用P53融合GAL4的DNA结合区，作为蛋白质X，以HeLa细胞cDNA文库融合GAL4的转录激活区为蛋白质Y，筛选到了一个人类新基因P53BP3。经原位杂交方法钓到了全长cDNA片段，测定了全序列，并进行了染色体定位和在16种正常人组织及7种肿瘤细胞株中的Northern杂交分析，为研究P53的作用原理开辟了新的途径。

本发明以P53为靶分子，利用酵母双向杂交系统从HeLa细胞cDNA文库中筛选到多个阳性克隆，测定各阳性克隆的cDNA序列，其中一个长度为1312bp的cDNA序列经基因数据库检索未发现同源序列，该cDNA序列编码437个氨基酸的肽段(图1)。Northern杂交的结果表明，该基因全长mRNA约为5.0kb。以上述1312bp的cDNA片段为探针，从HeLa cDNA文库中又获得4.0kb和1.8kb克隆片段(图2)。测定核苷酸序列后，可将它们拼接为5055bp的全长cDNA(图3)。其中5’非翻译区为2046bp，编码区为2445bp，编码815个氨基酸组成的蛋白质，3’非翻译区为564bp。