[发明专利]总RNA提取试剂及其制造方法以及提取总RNA的方法

权利要求书

1、一种总RNA提取试剂，含有RNA酶的高效抑制剂、去垢剂、抗氧化剂、PH调节剂、溶剂，高效抑制剂有异硫氰酸胍、溶剂为双蒸水和苯酚，其特征在于还有盐酸胍作为高效抑制剂，所含原料的比例(重量百分比)为：异硫氰酸胍15-45％、盐酸胍1-20％、去垢剂0.2-0.7％、消毒双蒸水10-35％、苯酚12％-46％、PH调节剂0.005-0.02％。

2、根据权利要求1所述的总RNA提取试剂，其特征在于去垢剂为十二烷基肌胺酸钠和十二烷硫酸钠，其用量分别为十二烷基肌胺酸钠0.12-0.35％、十二烷基硫酸钠0.1-0.31％。

3、根据权利要求1或2所述的总RNA提取试剂，其特征在于PH调节剂为柠檬酸三钠、醋酸钠和冰醋酸，其用量为柠檬酸三钠0.001-0.005％、醋酸钠0.005-0.01％，适量冰醋酸。

4、根据权利要求3所述的总RNA提取试剂，其特征在于用巯基乙醇作为抗氧化剂，用量为0.2-0.5％。

5、一种用于权利要求1所述的总RNA提取试剂的制造方法，是以异硫氰酸胍、盐酸胍两种RNA酶的高效抑制剂为主要原料，辅以十二烷基肌胺酸钠、十二烷基硫酸钠两种去垢剂，柠檬酸三钠、醋酸钠和冰醋酸提供盐分和调节PH值，以巯基乙醇作为抗氧化剂，以消毒双蒸水(经焦碳酸二乙酯预处理)为溶剂之一，先按以下比例(重量百分比)：异硫氰酸胍15-45％、盐酸胍1-20％、去垢剂0.2-0.7％、十二烷基胺酸钠0.12-0.35％、十二烷基硫酸钠0.1-0.31％、柠檬酸三钠0.001-0.005％、醋酸钠0.005-0.01％、消毒双蒸水10-35％，在45℃温度下混合溶解平衡0.1-2小时，再加入12-46％(或以上原料体积的0.5-1.5倍)的重蒸苯酚，室温冷却至2℃-30℃，用适量冰醋酸调至PH3.5-6.5，此即为总RNA提取试剂成品，储存于-70℃-+25℃。

6、一种使用权利要求1所述的总RNA提取试剂来提取总RNA的方法，其提取步骤如下：

①、按1ml总RNA提取试剂加入到用于提取总RNA的组织如50-100mg组织块(冰上匀浆)或10cm²的贴壁培养细胞或10⁵-10⁷的悬浮细胞中的比例混合，然后转入Eppendorf管，

②、加0.1ml氯仿、异戊醇的混合液〔氯仿∶异戊醇=(24-49)∶1〕振荡10秒种，进行翠取，

③、10000g离心，10分钟，在4℃温度，

④、取上层水相转入新的Eppendorf管(注意不要吸取界面)，

⑤、加等体积的-20--80℃预冷的异丙醇颠摇10秒钟，

⑥、10000g离心、10分钟、在4℃温度，

⑦、去上清液，得白色沉淀即总RNA，

⑧、加1ml75％酒精冲法RNA沉淀，

⑨、弃酒精，气干或真空干燥5分钟。

⑩、加适量RNA保护剂溶解RNA，低温储藏备用。