[发明专利]外源基因转化螺旋藻的方法

权利要求书

1、外源基因转化螺旋藻的方法，其特征是以含有外源基因的具有原核表达元件的质粒为载体，以螺旋藻细胞为受体，采用电激穿孔法进行转化处理，再将经转化处理后的螺旋藻细胞进行继代选择性培养，从而获得转基因螺旋藻；所说的电激穿孔法是在电压8000-11000伏、脉冲2⁷-2¹⁰、间隔1-3秒下电激10-20次。

2、按照权利要求1所述的方法，其特征是转化时质粒载体与螺旋藻受体的用量比例为5-10微克：10⁵-10⁶细胞数。

3、按照权利要求1或2所述的方法，其特征是包括以下步骤：1)按常规方法，对用作载体的质粒进行扩增，并提取和纯化，制得所需的质粒载体；2)将准备作为受体的螺旋藻培养至对数生长期，然后用溶菌酶处理，制得便于接受外源基因的单细胞螺旋藻受体；3)采用电激穿孔法，用质粒载体对螺旋藻受体进行转化处理；4)将经上述转化处理的螺旋藻细胞涂布于含有选择因子的Zarrouk培养基平板上，培养5-10天；然后挑取单一菌落，在加有选择因子的液体Zarrouk培养基中培养至光密度大于0.3；5)吸取少量经上述培养后的藻液转入新的加有选择因子的液体Zarrouk培养基中培养5-8天；同法反复接种培养至继代培养不低于20代。

4、按照权利要求3所述的方法，其特征是步骤(2)中用溶菌酶处理的时间为10-20小时，溶菌酶的用量为按W/V比占总液量0.5％-2.0％。