[发明专利]一种人类免疫缺陷病毒抗体阳性血清替代物

说明书

本发明涉及一种阳性血清替代物，具体地说就是一种人类免疫缺陷病毒抗体(HIV Ab)阳性血清的替代物，属于免疫学技术领域。

随着人类免疫缺陷病毒抗体酶联免疫测定试剂盒(HIV Ab EIA KIT)在全国的大规模生产和广泛使用，该类试剂盒中阳性对照血清的潜在感染性不容忽视。用于该类试剂盒的阳性对照血清虽经灭活处理，但目前对于既保持其中的人类免疫缺陷病毒抗体的活性又使其中的人类免疫缺陷病毒彻底灭活的方法并没有定论，因此，国内外所有采用间接酶联免疫吸附测定法(ELISA法)的该类试剂盒中的说明书都注明“本试剂盒所用人类免疫缺陷病毒抗体阳性对照血清(或血浆)已经灭活处理，但仍应视为感染性物质。”另外，由于国家对人类免疫缺陷病毒抗体阳性血浆管理十分严格，人类免疫缺陷病毒抗体阳性血清(或血浆)的购买不仅环节多，而且价格高。

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种安全的人类免疫缺陷病毒抗体阳性血清的替代物，这种替代物应既与人类免疫缺陷病毒抗体阳性血清的性能相当，又能完全避免阳性血清的潜在感染的危险性，而且该替代物还应该具有生产制备简单、成本低的特点。简言之，本发明提供一种安全、可靠、易得的人类免疫缺陷病毒抗体阳性血清替代物。

为实现本发明的目的所采取的技术措施是：

一种安全的人类免疫缺陷病毒抗体阳性血清替代物，它是将非人的人类免疫缺陷病毒抗体或其处理液与正常人免疫球蛋白或其处理液通过交联反应得到的交联物。本发明的实质是把非人的人类免疫缺陷病毒抗体的抗体活性(即与人类免疫缺陷病毒抗原的反应活性)和正常人免疫球蛋白的抗原活性(即与抗人免疫球蛋白抗体酶结合物的反应活性)相结合，从而达到消除人抗致病因子抗体阳性血清(或血浆)中可能带有致病因子的危险性又具备抗致病因子抗体阳性血清的反应性的目的。

其中，非人的人类免疫缺陷病毒抗体可以是单克隆抗体、基因工程抗体或人类免疫缺陷病毒抗原(病毒裂解物或合成肽或基因工程肽)免疫动物得到的抗体。可以是完整的抗体或具抗体活性的片段。正常人免疫球蛋白是指无人类免疫缺陷病毒抗体活性的人免疫球蛋白，即经酶免疫测定法(EIA)检测人类免疫缺陷病毒抗体为阴性的人免疫球蛋白，可以是完整的人免疫球蛋白或其片段。

交联的方法有多种，如常用的有戊二醛法、琥珀酰亚胺吡啶二硫基丙酯(SPDP)法、苯醌法等。

与已有技术相比，采用本发明的技术措施所取得的有益效果：

1．本发明的替代物来源于非人的人类免疫缺陷病毒抗体和正常人免疫球蛋白，因此从根本上避免了阳性血清潜在感染的危险性。

2．酶联免疫测定法(EIA)检测结果表明，替代物对酶标记第二抗体有很好的反应性；从整体上看，酶标记多抗的反应强于酶标记单抗，呈现出放大效果。

3．经37℃热稳定性试验，结果表明，替代物的热稳定性与真实的人类免疫缺陷病毒抗体阳性血清相当，即放37℃后，前3天样品的反应性都有所下降，后4天则趋于平稳。

4．本发明的替代物与真实的人类免疫缺陷病毒抗体阳性血清对不同浓度的酶标记第二抗体有近似一致的反应性和敏感性，它们与作对照的正常人血浆的反应性有很大的区别。

总之，本发明的人类免疫缺陷病毒抗体阳性血清替代物的热稳定性，对人类免疫缺陷病毒抗原及酶标记第二抗体的反应性和敏感性等主要性能指标与真实的人类免疫缺陷病毒抗体阳性血清相当，并从根本上避免了阳性血清的潜在感染的危险性，而且，获得该替代物的方法简单、成本低。因此，这种替代物具有安全、可靠、易得的特点，它的应用必将对人类免疫缺陷病毒抗体酶联免疫测定试剂盒的生产、使用产生极大影响。具有重要的使用价值和社会效益。

下面结合具体的实施例对本发明作进一步的说明：

实施例1：

①将8mg抗Ⅰ型人类免疫缺陷病毒gp160单克隆抗体(McAb)溶解于2ml 0.1MPH7.5 PBS(磷酸盐缓冲液)，于23℃下，搅拌加入0.2μmol SPDP(异型双功能交联物)，反应30分钟后，装透析袋，用0.1M PH7.5 PBS透析，换液四次。

②将16mg人丙种球蛋白(抗HIV抗体活性经EIA检测为阴性)溶解于2m1 0.1MPH7.5 PBS，于23℃下，搅拌加入0.4μmol SPDP，反应30分钟后，装透析袋，用0.1MPH4.5醋酸盐缓冲液透析，换液四次。加入终浓度为25mM的DTT(二硫苏糖醇)于23℃下，反应30分钟，装透析袋，用0.1M PH7.5 PBS透析，换液四次。