[发明专利]使用加工酶的嵌合蛋白质的切断方法

权利要求书

1、由下式表示的嵌合蛋白质，

A-L-B式中，A是保护肽；

B是目的肽；

L是接头肽，在其C末端部分具有序列：X1-X2-(Pro、Lys或Arg)-Arg(式中，X1和X2是任意的氨基酸)，而且在N末端具有富有His的部分。

2、权利要求1所述的嵌合蛋白质，其中，上述N末端的富有His的部分具有序列：[(His)₄-Pro-Gly]_n(式中，n是1-6)。

3、权利要求1或2所述的嵌合蛋白质，其中，在上述N末端部分的氨基酸序列和上述C末端部分的氨基酸序列之间存在1-5个任意的氨基酸。

4、权利要求1-3中任一项所述的嵌合蛋白质，其中，X1是Arg、Lys或His，而X2是His或Phe。

5、权利要求1-4中任一项所述的嵌合蛋白质，其中，A是不含氨基酸序列Pro-Arg、Arg-Arg和Lys-Arg的多肽。

6、权利要求1-4中任一项所述的嵌合蛋白质，其中，A是含有氨基酸序列Pro-Arg、Arg-Arg或Lys-Arg的多肽的场合时，该氨基酸序列中至少一种氨基酸被其他氨基酸取代，以便在A中不含有该氨基酸序列。

7、权利要求1-6中任一项所述的嵌合蛋白质，其中，A是220氨基酸残基以下的多肽。

8、权利要求7所述的嵌合蛋白质，其中，A是来自大肠杆菌的β-半乳糖苷酶的N末端侧的1位氨基酸至97位、117位或139位氨基酸的肽。

9、权利要求1-8中任一项所述的嵌合蛋白质，其中，A中的半胱氨酸残基被其他氨基酸取代。

10、权利要求9所述的嵌合蛋白质，其中，上述其他氨基酸是丝氨酸残基。

11、权利要求1所述的嵌合蛋白质，其中，B是人副甲状腺激素或其衍生物。

12、权利要求11所述的嵌合蛋白质，其中，上述人副甲状腺激素衍生物是具有从天然的人副甲状腺激素的N末端的1位或3位氨基酸残基至31位、34位、37位、38位或84位氨基酸残基的序列的片断，或者是在它们的C末端附加Gly的片段。

13、权利要求1所述的嵌合蛋白质，其中，B是GLIP-1或其衍生物。

14、权利要求1-13中任一项所述的嵌合蛋白质的制造方法，其特征在于，以包含编码该嵌合蛋白质的DNA的表达载体转化宿主细胞，培养所得到的转化体，从该培养物中提取上述嵌合蛋白质。

15、目的肽(B)的制造方法，其特征在于，使加工酶作用于权利要求1-13中任一项所述的嵌合蛋白质，切断接头肽(L)的C末端与目的肽(B)的N末端之间的肽键，得到目的肽(B)。

16、权利要求15所述的方法，其特征是，上述的加工酶是Kex2蛋白酶、フリン(Furin)、前体转变酶1/3(PC1/3)或者前体转变酶2(PC2)、或者它们的衍生物。

17、权利要求14-16中任一项所述的方法，其特征是，在得到目的肽(B)时使用等电点沉淀处理。