[发明专利]人羊膜的制备方法

说明书

本发明公开一种应用于外科手术、尤其是预防肌腱粘连的肌腱断裂修补手术中使用的人羊膜的制备方法。

肌腱损伤吻合后粘连是影响手、足功能恢复的重要因素之一，目前，临床上尚无很好的解决肌腱粘连的办法  防治肌腱粘连的办法和材料的研究是当今外科领域中的重要课题，传统的修复方法和材料，诸如肠衣、高分子材料制品等防治肌腱粘连，其效果均不尽理想。

近年来，随着显微技术和实验研究的发展，发现并证实肌腱是具有动脉，静脉循环，淋巴回流，滑液交换机理，揭示了肌腱具有内在愈合能力，而不依靠肌腱外的细胞和粘连。这一重大突破性发现为防治肌腱粘连，恢复肢体功能和更深入地研究开僻了一个新天地，肌腱鞘不再是影响肌腱愈合的主要因素。吻接肌腱的同时一期修复腱鞘被认为是防止肌腱粘连的有效举措，并且药物及理疗，早期控制性活动对肌腱愈合和肌腱粘连的影响也有了进一步了解。但对腱鞘已损坏，肌腱愈合处同时存在粗糙的骨折愈合断面，在行肌腱松解术后，极易再度形成粘连。如何预防此类粘连或松解后再粘连的发生尚无进展。国内外采用的肠衣、高分子材料制品如硅胶膜，聚四氟乙酰膜，其效果不尽满意，诸如排异反应，感染等，有的还需二次手术取出隔离膜，增加了病人的痛苦和经济负担。

本发明的目的在于提供一种可应用于外科手术中的人羊膜的制备方法。

本发明的技术方案是：

取正常分娩之胎膜，无菌条件下，将胎膜的胎儿面与含血管之子官面从中间分开，保留胎儿面，在生理盐水中洗去血液，这时羊膜(胎儿面)呈乳白色、均匀光滑、半透明状的薄膜，经1‰洁尔灭液浸泡3～5分种后，置入一盛有生理盐水的无菌容器中，放入冰箱中备用，经过这样处理的羊膜，作细菌配养72小时无菌生长。

冻干的人羊膜(成型膜)：此膜呈白色或微淡黄色，半透明，如竹纸，封入两层塑料袋中，用钴60辐射法消毒处理后(照射剂量0.5Mrad、1Mrad、1.5Mrad、2.0Mrad[兆拉德]备用。经此方法处理过的人羊膜培养7天无细菌生长。

用上述方法制备的人羊膜植入预防肌腱粘连与临床应用结果表明，人羊膜可以作为一种新的防粘连材料应用于临床  在进行断裂的肌腱修补时，在修补段肌腱外围植入人羊膜可以起到预防肌腱粘连作用，有利手术后肢体功能的恢复，减少肢体的残废，缩短治疗时间

作为同种异体的生物膜，人羊膜有如下的优点和特点：1.材料来源容易，几乎每天产房有胎膜提供；2.羊膜本身的营养采自弥散，适于游离移植，且它的通透性不影响肌腱的营养供给；3.免疫反应轻微、局部少量应用不产生明显的炎性反应或排斥反应；4.可吸收性佳，不需要二次手术取出。鉴于以上优点，首先进行人羊膜植入预防肌腱粘连的动物实验研究，在动物实验的基础上，过渡到预防修补肌腱粘连的临床应用。

一.动物实验部分：进行两次

1.自95年2月至6月，在长丰县杨庙镇养殖场，选择当地产肉鸡(AA品种)50只，体重2.0～2.5kg，雌雄不分，5只一组，共分10组。设实验组，对照组，空白组。手术后的实验鸡仍由养鸡场饲养员统一饲养。按计划术后1周、2周、3周…5周、6周、8周、10周、12周、16周，按组分批采取标本，作大体组织，病理光镜及电镜观察。由于羊鸡场条件较差，饲养的鸡较多，4月初又发生鸡瘟，实验鸡也跟着大批死亡。因实验鸡数量的减少，第一次实验基本失败。但从幸存的实验鸡初步观察结果来看，人羊膜在植入肌腱周围2周后仍可见到，3周后已辩别不清。植入羊膜实验组的肌腱较对照组，空白组的肌腱外周光滑，粘连较少。

2.自95年12月初至96年4月初，在合肥市第一人民医院进行了第2次动物实验。取相同的(AA品种)家30鸡只，体重2.0～2.5kg雌雄不分，五只一组，共分6组，编号分笼，专人饲养。设实验组、对照组、空白组。3个月、4个月采取标本。分别作(1)肉眼大体标本观察(全部标本)；(2)组织切片光镜观察(共24只鸡、48个标本)；(3)扫描电镜观察(共6只鸡，12个标本)。结果表明：腱周的人羊膜组织相容性好，排斥反应轻微，修复中的肌腱与周围组织无明显粘连，术后3、4周的标本可见羊膜出现退变、吸收，在腱周形成裂隙，有利于肌腱运动。

二.在上运动物实验基础上，进行临床应用

在初步观察实验肌腱周围组织变化的基础上，开始少量，有选择性的临床应用，治疗效果满意，术后伤口无明显炎症反应，未出现排斥反应现象，伤口愈合佳，术后2、3周检查吻合肌腱张力正常，病人主动作伸屈动作时肌腱无明显粘连。

三.人羊膜的制备方法