[发明专利]绣线菊二萜生物碱,其制备方法和用途

说明书

本发明涉及通式(I)所示的ATISINE型绣线菊二萜生物碱，其制备方法，以及作为PAF拮抗剂、花生四烯酸拮抗剂的应用，以及在制备治疗心脑缺血、炎症、过敏、哮喘疾病药物中的应用。

现有技术中未见有从粉花绣线菊(Spiraea japonica)植物中分离的结构特征如通式(I)的生物碱的报道。

本发明的目的在于提供通式(I)所示的ATISINE型二萜生物碱，制备通式(I)化合物的方法，以及通式(I)所示的生物碱作为PAF拮抗剂、花生四烯酸拮抗剂的应用，和在制备治疗心脑缺血、炎症、过敏、哮喘疾病药物中的应用。

本发明提供了如下通式(I)所示的ATISINE型二萜生物碱：

式中R₁代表甲基或羟基，R₂代表甲基或羟基，R₃代表氢或乙酰基，19位碳为R构型或S构型。

本发明同时提供了制备通式(I)所示化合物的方法：取粉花绣线菊(Speraeajaponica)的干根粉末以75-95％乙醇冷浸5-7天，经减压浓缩除去乙醇得浸膏，用2-4％盐酸溶解，酸液分别用石油醚-苯(1∶1)萃取3次以脱脂，再用NaOH水溶液碱化至PH＝11左右，用氯仿萃取3次，萃取液经水洗至中性，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得总生物碱部分，然后经硅胶H减压短柱层析，分别以不同比例的石油醚-丙酮-二乙胺梯度洗脱，即得到通式(I)所示各生物碱。

本发明还提供了通式(I)生物碱在制备抗炎药物中的应用；在制备抗过敏药物中的应用；在制备抗哮喘药物中的应用；在制备治疗心脑缺血病药物中的应用，以及用通式(I)生物碱作为PAF拮抗剂和花生四烯酸拮抗剂。

下面用本发明通式(I)所示的ATISINE型二萜生物碱的药理实验结果来说明本发明的有益效果：

实验动物：健康家兔，2-3公斤，雌雄均用。

药品及试剂：本发明的通式(I)生物碱以蒸馏水溶解并调PH至6.5。

血小板活化因子(Platelet activating factor)和花生四烯酸(Arachidonicacid)均系Sigma公司产品，前者溶于含0.25％BSA的tris-NaCl缓冲液中，PH7.6；后者溶于无水乙醇中，使用前以1％Na₂CO₃稀释成0.5％的工作液，二磷酸腺甘溶于磷酸盐缓冲液中。

方法：按常规方法制备富血小板血浆(PRP)和贫血小板血浆(PPP)，实验过程中，PRP中的血小板数控制在5X10⁸cell/L。然后进行血小板凝聚性测定。

1、体外实验：按Born氏比浊法原理采用BS-631型血小板凝聚仪进行，药物与血小板作用5分钟后，加入诱导剂测试并记录最大凝聚百分率，以【(对照管凝聚％-样品管凝聚％)/对照管凝聚％】X100％计算血小板凝聚抑制率。

体外实验表明，绣线菊碱Q明显抑制AA诱导的血小板凝聚，并呈量-效关系，IC₅₀为18.7μmol/L，而对PAF和ADP诱导的血小板凝聚无明显抑制作用，绣线菊碱T、U、V显著抑制PAF诱导的血小板凝聚，有浓度依赖关系，IC₅₀分别为57.8μmol/L，55.4μmol/L和52.2μmol/L，但不抑制AA或ADP诱导的血小板凝聚。

2、体内实验：兔分两组，一组经耳缘注入生物碱(均2.0mg/kg)，另一组注入等体积的蒸馏水，给药前取血一次，给药后分别于不同时间点自颈动脉取血制备PRP和PPP，观察体内给药，药物对PAF、AA和ADP诱导的血小板凝聚的影响，方法同前。

体内实验表明，绣线菊碱Q静脉给药后(2mg/kg)，主要抑制AA诱导的血小板凝聚，其作用特点是：给药后10分钟即显示很强的抑制作用(抑制率：100％)，给药90分钟的抑制率仍高达81.3％，至180分钟时药效基本消失(表1)。

绣线菊碱T或U或P(2mg/kg)在体内不仅抑制PAF诱导的血小板凝聚，还显著抑制AA诱导的凝聚，其作用表现为：对PAF诱导的凝聚，于给药后2小时显示较强的抑制作用(抑制率均为65.0％以上，P＜0.05vs 0min)，至4小时仍有明显抑制作用；对AA诱导的凝聚，于给药后1小时即具有很强的抑制作用(抑制率均为99％以上)，4小时的抑制率依然高达75.0％以上。作为说明，仅用表2列出绣线菊碱T对AAPAF和ADP诱导的血小板凝聚的抑制作用。表1.生物碱Q对AA，PAF和ADP诱导的血小板凝聚的抑制作用