[发明专利]一种单克隆抗体,能生产该抗体的细胞系及该抗体的用途

说明书

本发明涉及一种用于对具有分子量约为20,000的人生长激素进行测定的单克隆抗体；一种能生产该单克隆抗体的细胞系和一种借助于该单克隆抗体对具有分子量约为20,000的人生长激素进行的灵敏的免疫测定方法。

众所周知，在人体中存在两种主要的人生长激素(有时称为“hGH’)；具有分子量约为22,000(称为“22k hGH”)和约为20,000(称为“20k hGH”)的肽激素。22k hGH是一种具有191个氨基酸的蛋白质，而20k hGH是一种具有176个氨基酸的蛋白质。

20k hGH和22k hGH两者原本都是由一个单个基因编码的蛋白质，所以他们的氨基酸序列非常相似，所不同的是20k hGH的结构是在22k hGH的N-末端缺失了第32位到第46位的15个氨基酸。

众所周知，一位正常分泌的成年人，早晨的hGH水平低于约5纳克/毫升的基础水平。

过去的研究表明人体中存在的22k hGH远远高于20k hGH；具体地说，20k hGH能够达到总hGHs的5到20％。

血液的hGHs水平变化恒定而且大，即，在一天中有明显变化并在运动或睡觉时增高。然而，通过测定从人脑垂体提取的hGHs已经得到如上所述的20khGH和22k hGH的定量比例。所以，在人体天然分泌动力学中他们之间的定量比例仍然未知并且是否在一个短时间内变化也是未知的。

作为一种药物，22k hGH已经市售，并且比20k hGH研究更深入。

最近报道了20k hGH的生物学活性；它的生长促进活性与22k hGH相当，在异常葡萄糖耐药性方面其诱导性更低并且是更不可致糖尿病的(Lewis，U.J.等人，Endocriniol.Japan，34，73-85(1987))。这表明当一种人生长激素用作药物时，20k hGH比22k hGH具有更小的不利药物反应的危险性。所以，作为对具有生长激素缺陷成人的替代疗法的一种药物，20k hGH的用途越来越受到关注(HisaoSeno，Igaku No Ayumi，165，247-251(1993))。

然而，在本发明人最近首先建立制备方法之前还没有生产大量纯净20khGH的成功例子，所以，还没有得到足够量和纯化的20k hGH用于实施各种研究。所以20k hGH还没有应用于临床。另外，由于还没有研制出检测20k hGH的灵敏的免疫测定方法，一个长时间内还难于决定20k hGH和22k hGH的活性和分子结构之间的关系。过去对20k hGH的研究主要处在利用少量从活体提取的20k hGH进行的分子或细胞水平上，并且还没有20k hGH的临床研究。

下文将描述hGHs的测定方法。现有几种已知的人血液或尿中的hGHs的测定方法可解释hGHs的生物学作用(例如，Hashida和Ishikawa等人，Clinica.Chimica.Acta，162，229-235(1987))。

对于作为一种药物开发hGHs，在临床试验中测定精确的分泌动力学包括人体中hGHs的一个基线血液水平是必要的。另外，要求测定方法灵敏而没有误差。

由于22k hGH已经应用于临床，存在有能够测定早晨22k hGH的基线血液水平(低于5纳克/毫升)的免疫测定方法。

例如，对于22k hGH，在日本专利待公开No.273496/88(JP-A 63-273496)中已经公开了利用一种特异于22k hGH的抗体的免疫测定方法。该专利说明书叙述了它与20k hGH的交叉反应性为15％，然而，由于没有说明用于该方法的标准20k hGH的纯度水平，上述百分比可能是十分可疑的。

另一方面，以前所有的20k hGH的免疫测定的例子是在运动负荷下的一个较高的20k hGH分泌值(1纳克/毫升)测定的。由于没有足够的交叉反应性和灵敏性任何以前的测定方法只在细胞水平调查人20k hGH，即，不具有一个足够的灵敏度来测定它的基线血液水平。

已知的20k hGH的免疫测定如下。