[发明专利]一种抗溶血脂质体制剂

说明书

本发明涉及一种抗溶血脂质体制剂，特别是一种含有脑硫脂、卵磷脂和脑苷脂类的用于治疗溶血、尤其是补体诱导的溶血的脂质体制剂。

一些疾病和失调伴随着红细胞的溶血，例如新生儿的疾病、阵发生夜间血红蛋白尿。如果血的选择不很正确，溶血可能在输血时发生，或在错误血型不相容的情况下进行骨髓移植时发生溶血。

EP0394035A₂公开了糖蛋白MACIF(膜反应复合体抑制因子)在红细胞膜里的可溶形式用于防止溶血。近来，具有人的MACIF活性的蛋白质从有表达载体的转化细胞获得，其含编码这种蛋白质的基因。但由于其高价和可能的副作用限制了这种蛋白质作为治疗剂的应用。

本发明的目的是提供一种抗溶血脂质体制剂，其含有16-90wt％脑硫脂、5-70wt％卵磷脂、5-40wt％脑苷脂类和0-30wt％胆甾醇，其中脑硫脂是选自脑苷脂硫酸酯、磺基乳糖神经酰胺、磺基半乳糖二酰基丙三醇和磺基半乳糖烷酰基丙三醇中一种或多种。其中优选的脑硫脂是脑苷脂硫酸酯。

本发明的制剂可用下列两步获得：i)使用商业市场上的类脂类或从哺乳动物的脑或脊髓萃取的类脂类获得具有所述成分的类脂类混合物；和ii)将所述类脂类混合物分散在等渗溶液中。

制剂的50％活性(IC₅₀)浓度是4-120μg/ml，取决于脑硫脂和其它极性类脂类的含量。

但是，本发明的另一个目的是提供一种用于制备所述抗溶血脂质体制剂的便利方法，包括下列步骤：i)均化哺乳动物的脑或脊髓；ii)用丙酮除去水和中性类脂类；iii)用低级醇(甲醇、乙醇、异丙醇)萃取极性类脂类；iv)减压蒸发萃取液；v)用氯仿或二氯甲烷溶解残留物；vi)用丙酮沉淀极性类脂类；vii)重复步骤v)和vi)数次；viii)除去有机溶剂，得到类脂类混合物。

用该方法获得的类脂类混合物含18-40％脑苷脂硫酸酯、10-30％卵磷脂、15-30％脑苷脂、10-25％磷脂酰乙醇胺和其它磷脂酰丝氨酸和神经鞘磷脂等。这种制剂的50％活性(IC₅₀)浓度是4-15μg/ml。

本发明的脂质体制剂可用下列方法获得。

通过在氯仿、甲醇和/或乙醇中溶解含脑硫脂的极性类脂类混合物获得抗溶血类脂类组分.除去溶剂后，加入等渗溶液。然后，类脂类制剂通过充分的振荡和超声波处理被均化和分散。最后，分散液用0.7μ或0.4μ的膜过滤器在无菌条件下过滤。本发明的脂质体的尺寸小于1μ，优选不大于0.5μ，因为这是静脉内给药要求的。

本发明的抗溶血脂质体制剂的适应症如下。1)补体诱导的溶血的抑制

本发明的制剂可抑制补体诱导的溶血，诸如新生儿溶血疾病、阵发性夜间血红蛋白尿。对该溶血的有效浓度是约0.5μg/ml-20mg/ml。2)低渗溶血的抑制

已知由于细胞内外的渗透压的不同，哺乳动物的细胞在低渗溶液中破裂。一些感染会伴随低渗溶血。这个制剂由于脑硫脂中的强酸性基团而具有强的负电荷。因此，这个制剂可用于防止低渗溶血。对于这种情况有效浓度是约0.01mg/ml-0.0mg/ml。3)用于保存血液和含红细胞的制品

本制剂用于保存和处理血液和含血制品、组织或器官。该血制品可进一步含有血液保存添加剂，例如抗凝剂和营养成分。典型的添加剂包括氯化钠、柠檬酸、柠檬酸钠、葡萄糖、磷酸二氢钠、甘油、叶酸、腺嘌呤和L-抗坏血酸。本发明的制剂也用作血液保存添加剂。

本发明可由下列实施例更具体地说明。但本发明的范围不受这些实施例的限制。实施例1

本实施例说明本发明从牛脊髓制备制剂的方法。该方法适用于任何其它原料：任何哺乳动物的脊髓、任何哺乳动物的脑和任何哺乳动物含脑硫脂的组织。步骤1获得含脑硫脂的类脂类混合物