[发明专利]栝楼蛋白，其制备方法和在制药中的应用

说明书

本发明属于抗艾滋病药物领域，尤其涉及栝楼蛋白在制备治艾滋病的药中的应用。

艾滋病(AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的破坏机体免疫系统的致死疾病。由于目前尚无可预防的有效疫苗，抗AIDS药物成为防治AIDS的主要手段。当前临床用抗AIDS药物均为化学合成药，往往毒副作用大，易产生耐药性等缺点。从传统药物和天然资源中寻找新的抗AIDS药物或先导化合物的研究，是当前国内外新药研制中的重要研究方面和非常活跃的领域。从天然资源中至少已发现几十种化合物具有抗HIV的活性。此外，对以天花粉蛋白为代表的核糖体失活蛋白(Ribosomeinactivating proteins，RIP)的抗AIDS活性的研究已成为目前国内外研究的重点。RIP是一类作用于真核细胞核糖体，抑制蛋白质合成的毒蛋白，而其中的代表天花粉蛋白(Trichosanthin，TCS)是从葫芦科植物栝楼(Trichosanthes kirilowii)球根中提取的一种由247个氨基酸组成的碱性单链蛋白，分子量为27KDa，pI为9.4，不含半胱氨酸和糖基[Chow et al，1990；Collin et al，1990]。TCS具有RNA N-糖苷酶活性[Zhang and Liu，1992]。TCS是我国自己创制的为数不多的新药之一。

本发明的目的是基于上述现有技术基础，提供一种新的具有抑制HIV的活性的核糖体失活蛋白-栝楼蛋白(Trichobitacin)，同时提供其制备方法。

为了实现本发明的目的，本发明提供了如下技术方案：

栝楼蛋白，为一种从栝楼植物的块根压完汁后的残渣中分离得到的单链核糖体失活蛋白，分子量27，228Da，等电点9.6，糖含量0.7-0.9％，具有RNA N-糖苷酶活性，N-端和C-端氨基酸是门冬氨酸和丙氨酸，N-端38个氨基酸的序列，除31位为异亮氨酸外，与天花粉蛋白一样。

本发明还提供了制备上述栝楼蛋白的方法，取栝楼块根，压完汁后的残渣用生理盐水浸泡后，用丙酮沉淀，收集沉淀冷冻干燥后，用Sephadex G-50或G-75和CM-Sephadex C-50纯化，取柱层析分离出的峰I即可。然后用高效液相色谱HPLC，SDS-凝胶电泳SDS-PAGE和高效毛细管电泳HPCE等方法鉴定其纯度，以电子处旋-质谱ES-MS测定其分子量，等电点聚焦电泳测定等电点，酶解后用自动测序仪测定部分氨基酸序列。

本发明还提供了栝楼蛋白作为制备治艾滋病药的应用。

下面用本发明的栝楼蛋白的药理实验结果来说明本发明的药效作用和有益效果：

1、栝楼蛋白对HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体的抑制作用：