[发明专利]从鸡血中提取鸡核酸及核蛋白的方法

说明书

本发明涉及一种核酸的制备方法。

核酸是人体和生物体的主要遗传物质，它对生物的生长、发育、遗传、代谢等生命活动起着重要的作用，使用核酸具有调节代谢、增加营养、抗衰老和增加机体的抵抗力的作用。因此人们发明了多种提取核酸的方法。如在1996年3月6日发明专利公报上公开的一种<从天然植物细胞中提取核酸的生产工艺> (申请号94115437.8)它是以大豆粕为原料采用生物化学提取技术制备核酸的。该植物性核酸与动物性核酸有一定差异，不易被人体吸收。也有人研究出易被人体接受的核酸，如在1994年10月19日发明专利公报上公开的一种<人体胎盘核酸的制备方法及其应用>(申请号93111041.6)它是以新鲜胎盘为原料，在-10～-70℃迅速冷冻，并在低温下破碎胎盘组织，采用透析方法提取核酸，随着计划生育工作的开展，原料来源比较困难，而且制备条件比较苛刻，不易工业化生产。

本发明的目的在于提供一种以废弃的鸡血为原料，采用比较简单的生化提取技术制备核酸及核蛋白的方法。

本发明的目的可通过以下措施来实现：一种从鸡血中提取鸡核酸的方法，其特征在于：

(1)原料及处理：取新鲜鸡血并向其内加入0.5克/每100毫升鸡血的柠檬酸钠抗凝剂，

(2)从抗凝鸡血中提取细胞核，

①对沉降后的抗凝鸡血进行血细胞匀浆破碎处理，或②对沉降后的抗凝鸡血进行低渗盐溶血方法处理，或③对抗凝鸡血直接进行匀浆处理，

(3)从细胞核中提取核酸，

①浓盐法：用5～10％的氯化钠於4℃对细胞核处理20小时，且两者的体积比为细胞核∶氯化钠溶液＝1∶30，用蛋白质变性剂处理核蛋白溶液，再用无水乙醇处理核酸溶液，或②去垢剂法：用20％十二烷基磺酸钠於PH＝9.0处理细胞核终浓度2％，用蛋白质变性剂处理核蛋白溶液，再用无水乙醇处理核酸溶液，或③稀碱法：用1N氢氧化钠或氢氧化钾溶液於PH＝12.6对细胞核处理30分钟，用蛋白质变性剂处理核蛋白溶液，再无水乙醇处理核酸溶液。

一种从鸡血中提取鸡核蛋白的方法，其特征在于：

(1)原料及处理：取新鲜鸡血并向其内加入0.5克/每100毫升鸡血的柠檬酸钠抗凝剂，

(2)从抗凝鸡血中提取细胞核，

①对沉降后的抗凝鸡血进行血细胞匀浆破碎处理，或②对沉降后的抗凝鸡血进行低渗盐溶血方法处理，或③对抗凝鸡血直接进行匀浆处理，

(3)从细胞核得到核蛋白，用5～10％氯化钠溶液於4℃对细胞核处理20小时且两者的体积比为细胞核∶氯化钠溶液＝1∶30，得到的核蛋白溶液或用乙醇处理或用冷水处理。

本发明提取核酸的方法主要包括如下过程：(1)原料及其处理：本发明的原料为家禽血，最好是鸡血。为防止新鲜鸡血凝结不便操作，因此必须向新鲜鸡血中加入抗凝剂。该抗凝剂可以是草酸钠、最好是柠檬酸钠，用量为每100毫升鸡血添加0.5克柠檬酸钠。(2)从鸡血中提取细胞核：可以有三种做法①对沉降后的抗凝鸡血进行血细胞匀浆破碎处理，a取抗凝的鸡血，通过离心法或自然沉降法去除上层血浆，收集下层的血细胞。b将血细胞进行匀浆破碎处理，使其释放出细胞核，离心收集细胞核洗涤备用。②对沉降后的抗凝鸡血用溶血方法处理：a取抗凝鸡血通过离心法和自然沉降法去除上层血浆，收集下层的血细胞，b将血细胞用溶血方法处理，使其释放出细胞核该溶血方法包括低渗盐溶液处理法和氮气空化作用处理法，最好是采用低渗盐溶液处理法，即用0.2％的氯化钠溶液对血细胞处理30分钟，两者的体积比为血细胞∶0.2％氯化钠＝1∶8，离心收集细胞核洗涤备用。③对抗凝鸡血直接进行匀浆处理：a取抗凝鸡血直接进行匀浆处理，使细胞破碎，释放出细胞核，b离心去掉含血浆和血红蛋白的上清液，收集细胞核洗涤备用。(3)从细胞核中提取核酸：可以有三种方法

①浓盐法

a用5～10％的氯化钠，最好是10％氯化钠浓盐液处理细胞核，两者的体积比为细胞核液∶氯化钠溶液＝1∶30，於4℃处理20小时，得到粘稠的核蛋白溶液。

b用蛋白质变性剂处理核蛋白溶液，其蛋白质变性剂有多种，如苯酚、氯仿、二乙基焦碳酸、硫氰酸胍、氯化胍等，它们可单独使用，也可交替或联合使用。最好是用苯酚或氯仿对核蛋白溶液进行多次处理，除去核蛋白溶液的蛋白质，即可得到核酸溶液。

c将核酸溶液用无水乙醇处理得到核酸沉淀，干燥后即为核酸干品。

②去垢剂法