[发明专利]硫醚类结合物

说明书

将细胞毒药物连接到抗体上的双功能化合物是已知的。这些化合物尤其可用于构成对准肿瘤结合抗原的免疫结合物。该免疫结合物可以选择性输送有毒药物到达肿瘤细胞(例如参见Hermentin和Sei1er,"Investigations With Monoclonal Antibody Drug Conjugates",BehringInsti.Mitl.82:197～215(1988)；Gallego等，"Preparation of FourDaunomycin-Monoclonal Antibody 791T/36 Conjugates With Anti-TumorActivity",Int.J.Cancer 33:737-44(1984)；Amon等，"In Vitro and In VivoEfficacy of Conjugates of Daunomycin With Anti-Tumor Antibodies”,Immunolgical Rev.62:5～27(1982))。

Greenfield等近来报道了含有酰肼化合物3-(2-吡啶基二硫)丙酰基酰肼的、通过酰腙键结合到蒽环分子13位的酮上，并且该蒽环衍生物与抗体分子结合的对酸敏感的免疫结合物的构成(Green-field等，欧洲专利公布号0328147,1989年8月16日公布，该专利对应于未决的美国专利系列号70/270,509,1988年11月16日申请，美国专利系列号07/155,181,1988年2月11日申请，现已放弃)。上述后面的参考文献还公开了具体的含硫醚的连接物和结合物，包括含有腙硫醚的免疫结合物。

Kaneko等(美国专利系列号07/522,996,1990年5月14日申请，该专利对应于欧洲专利公布号0,457,250，公布日期1991年11月21日)还公开了含有蒽环抗菌素的结合物的构成：在蒽环分子的C-13位上通过酰腙连有双功能的连接物。在他们的发明中，连接物含有活性的吡啶基二硫或邻硝基苯基二硫基团，连接物通过这些基团与连接到细胞活性配位体上的合适基团反应，生成完整的结合物。

提供在靶枪和药物分子之间含有对酸敏感键的另外化合物用于体内治疗是有用的。因此，本发明提供了治疗上有效的药物分子与能够识别选择性靶细胞群体的配位体键合的新化学。然后，可应用该连接物化学来制备治疗上有效的结合物。本发明还提供了含有该结合物的组合物、制备本发明结合物的方法、治疗或预防有选择的疾病的方法，该方法包括给病人服用本发明的结合物，本发明还提供了制备还原抗体的新方法，该还原的抗体可作为靶枪配位体用于制备本发明的结合物。

按照本发明，每个药物分子均经过含硫醚的连接物臂连接配位体。药物是通过酰腙键连接连接物。通过配位体上或连接配位体的短的“隔离基团”上的巯基与“迈克尔加成接受体”反应(在反应之后变成“迈克尔加成加合物”)，生成硫醚键。在较好的具体实例中，靶枪配位体通过共价硫醚键直接地连接在连接物上。

上述新的结合物具有通式(Ⅰ)，其中D为药物部分，

n为整数1～10，

p为整数1～6，

Y为氧或NH₂⁺Cl^-，

Z为零或1，

q为约1～10，

X为配位体，

A为迈克尔加成加合物部分。

在一个具体实例中，药物部分为蒽环抗菌素，配位体为抗体。

在较好的具体实例中，蒽环化合物13位酮通过酰腙键使蒽环化合物与结合物的连接物部分结合。在尤其好的具体实例中，上述连接通过还原的二硫化物基团进行(即游离巯基(-SH)在抗体上)。

在最好的具体实例中，蒽环药物部分为阿霉素，迈克尔加成接受体(由该接受体生成迈克尔加成加合物)为马来酰亚氨基，抗体部分为嵌合的抗体。

本发明的结合物既保留了选择性处理靶细胞群体的特性，也保留了治疗活性。它们可用于药物组合物，例如该组合物含有药学上有效剂量的式(Ⅰ)化合物以及药用载体、稀释剂或赋形剂。

图1A提供了应用SPDP作为巯基化剂制备巯基化抗体的合成反应式。

图1B提供了制备本发明免疫结合物的合成反应式，其中配位体为SPDP-巯基化的抗体。

图1C提供了制备本发明免疫结合物的合成反应式，其中配位体为亚氨基四氢噻吩-巯基化的抗体。

图2表示用DTT还原抗体以制备“宽松的”抗体和合成本发明免疫结合物的方法。

图3提供了本发明的BR64-阿霉素结合物对L2987肿瘤的体外细胞毒活性数据。