[发明专利]一种葡萄糖异构酶的247位单突变体酶和138,247位双突变体酶及其构建方法

权利要求书

1.一种7号淀粉酶链霉菌M1033葡萄糖异构酶SM33 GI的突变体酶SM33 GI G247D，其特征在于将SM33 GI的第247位的甘氨酸Gly.G突变成了天门冬氨酸Asp.D。

2.一种7号淀粉酶链霉菌M1033葡萄糖异构酶247位突变体酶SM33 GI G247D的制备方法，其特征在于，根据SM33 GI的基因序列，设计并合成引入Asp于247密码子的定点突变引物，对SM33 GI基因进行定点突变，测定DNA序列，鉴别出247位甘氨酸Gly变成天门冬氨酸Asp的突变体，并进行表达。

3.一种7号淀粉酶链霉菌M1033葡萄糖异构酶SM33 GI的138位和247位双突变体酶SM33 GI G138P G247D，其特征在于将SM33 GI G247D的带有247位天门冬氨酸Asp的基因片段替代了SM33 GI的138位突变体酶SM33 GI G138P的相应片段。    

4.一种7号淀粉酶链霉菌M1033葡萄糖异构酶SM33 GI的双突变体酶SM33 GI G138PG247D的制备方法，先根据SM33 GI的基因序列，设计并合成引入Pro138密码子的定点突变引物，对SM33 GI基因进行定点突变，测定DNA序列，鉴别出138位甘氨酸Gly变成脯氨酸Pro的突变体，进行表达，获得突变体酶SM33 GI G138P；其特征在于：再根据SM33 GI的基因序列，设计并合成引入Asp于247密码子的定点突变引物，对SM33 GI基因进行定点突变，测定DNA序列，鉴别出247位甘氨酸Gly变成天门冬氨酸Asp的突变体，并进行表达，获得突变体酶SM33 GI G247D；然后分别将SM33 GI G138P及SM33 GI G247D的基因用XhoI酶切，将SM33 GI G138P基因的带有G138P的5’端DNA片段与SM33 GI G247D基因带有G247D的3’端DNA片段，用T4连接酶连接成为带有G138P、G247D双突变位点的SM33 GI基因，并进行表达。