[发明专利]益生菌在提高机体特异性免疫力及疫(菌)苗发展中的应用

说明书

本发明涉及益生菌如双歧杆菌、嗜酸乳杆菌和表达保护性抗原基因的大肠杆菌，特别涉及使用它们来提高经疫(菌)苗初次免疫或自然感染获得初次免疫机体的特异性免疫水平，以及它们在疫(菌)苗发展和免疫策略方面的应用。

理想的疫(菌)苗应符合两个条件：一是安全性好，二是具有良好的免疫原性。两者通常是一对矛盾，要么安全性较好，免疫原性较差；要么免疫原性较好，毒副作用较强。这种矛盾限制了疫(菌)苗在实践中的应用和发展。目前，疫(菌)苗的免疫接种方案多为先初次接种，经过一定时间后再实行加强免疫。这种免疫策略程度不一地存在着操作复杂、成本增加、使用麻烦尤其儿童难以接受等缺点。

双歧杆菌和嗜酸乳杆菌是人和动物肠道内正常菌群的重要的成员，在抗感染、调节机体免疫、抗衰老、抗肿瘤和提供某些营养物质等方面起着非常重要的作用。肠道正常大肠杆菌也是正常菌群成员之一，它作为保护性抗原基因的载体，在疫(菌)苗研究中被广为使用。但是，本发明所涉及的利用益生菌如双歧杆菌、嗜酸乳杆菌和表达保护性抗原基因的大肠杆菌来提高机体特异性水平和免疫力的免疫程序和策略，在国内外未有报道。

本发明之目的，是利用益生菌如分叉双歧杆菌、嗜酸乳杆菌和表达疫(菌)苗保护性抗原基因的大肠杆菌，对经疫(菌)苗皮下注射和口服途径初次免疫的机体，或自然感染获得初次免疫的机体，经过一定时间后，通过与初次免疫相同的途径，分别和以其不同的组合对初次免疫机体进行免疫调节，来解决经疫(菌)苗初次免疫或自然感染获得初次免疫以后，特异性免疫力下降和保护期短的问题。

本发明的内容要点与技术方案如下：

1.选用无特异病原体(Specific pathogen free SPF)动物BALB/c小鼠(购自卫生部北京药品生物制品检定研究所)，雌雄各半，随机分组，雌雄分盒饲养。

2.菌种来源于中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所，菌种主要特征(见附表1)。

附表1.             菌种的主要特征

名称                 主要特征

福氏2a志贺氏菌301    野生型毒株

痢疾I型志贺氏菌112   野生型毒株

DOM3*          双价(福氏2a、痢疾I型志贺氏菌)菌苗；

                   thyA-；无抗生素抗性

E.coli X511    表达痢疾I型志贺氏菌脂多糖的大肠杆菌

分叉双歧杆菌      从正常儿童粪便中分离

嗜酸乳杆菌

E.coli LE392      基因工程菌株

*志贺氏菌双价菌苗候选株DOM3：以福氏2a志贺氏菌thy A基因缺陷株为受体菌，转入痢疾I型志贺氏菌的菌体抗原基因构建而成。