[发明专利]组织型纤溶酶原活化剂(t－PA)变体:组合物及使用方法

权利要求书

1.具有R275并且在丝氨酸蛋白酶区至少有一个其它氨基酸残基被非碱性氨基酸残基取代从而破坏了天冬氨酸477和赖氨酸429之间的盐桥相互作用的变体单链人组织型纤溶酶原活化剂蛋白质。

2.权利要求1的蛋白质，其中非碱性氨基酸残基选自含有甘氨酸丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、酪氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸和谷氨酸的组中并且所具有的酶原性至少为10。

3.权利要求1的蛋白质，具有酶原性至少为50。

4.权利要求1的蛋白质，具有酶原性至少为100。

5.权利要求1的蛋白质，具有血纤蛋白刺激倍数至少为10,000。

6.权利要求1的蛋白质，具有血纤蛋白刺激倍数至少为20,000。

7.权利要求1的蛋白质，具有血纤蛋白刺激倍数至少为10,000。

8.权利要求2的蛋白质，具有血纤蛋白刺激倍数至少为20,000。

9.权利要求3的蛋白质，具有血纤蛋白刺激倍数至少为20,000。

10.权利要求1的蛋白质，其中与野生型单链人组织型纤溶酶原活化剂蛋白相比，其被PAI-1抑制至少要少5倍。

11.权利要求1的蛋白质，其中与野生型单链人组织型纤溶酶原活化剂蛋白相比，其被PAI-1抑制至少要少9倍。

12.权利要求1的蛋白质，其中与野生型单链人组织型纤溶酶原活化剂蛋白相比，其被PAI-1抑制至少要少200倍。

13.权利要求8的蛋白质，其中与野生型单链人组织型纤溶酶原活化剂蛋白相比，其被PAI-1抑制至少要少9倍。

14.权利要求8的蛋白质，其中与野生型单链人组织型纤溶酶原活化剂蛋白相比，其被PAI-1抑制至少要少200倍。

15.权利要求1的蛋白质，其具有的血纤蛋白选择性倍数至少为100。

16.权利要求8的蛋白质，其具有的血纤蛋白选择性倍数至少为100。

17.权利要求14的蛋白质，其具有的血纤蛋白选择性倍数至少为100。

18.编码权利要求1的蛋白质的多聚核苷酸。

19.含有权利要求18的多聚核苷酸的表达载体。

20.含有权利要求19的表达载体的细胞。

21.选自R275E，H417D，R25E，H417E和R275E，K429Y的变体单链人组织型纤溶酶原活化剂蛋白质。

22.编码权利要求21的蛋白质的多聚核苷酸。

23.含有权利要求22的多聚核苷酸的表达载体

24.含有权利要求23的表达载体的细胞。

25.在可药用的适当的赋形剂中含有生理有效量的权利要求1的蛋白质的用于治疗血栓形成疾病的组合物。

26.权利要求25的组合物，其中蛋白质的剂量从约0.05毫克/千克体重到约0.2毫克每千克体重。

27.包含权利要求1的蛋白质的抗体的诊断试剂盒。

28.包含权利要求1的蛋白质的诊断试剂盒。

29.含有能与权利要求18的多核苷酸杂交的多核苷酸的诊断试剂盒。

30.制备变体单链人组织型纤溶酶原活化剂蛋白质的方法，包括将权利要求24的细胞进行培养的步骤。

31.权利要求30的方法，其进一步包括纯化该蛋白质的附加步骤。