[发明专利]抗原特异性IgM的检测

说明书

本发明涉及一种用于测定体液中M类免疫球蛋白的抗原-特异性抗体的方法，该方法通过与至少两种不同的受体R₁和R₂一起培养所述的样品，其中的两种受体都能特异性地结合到抗体上，R₁被结合或者可以被结合到固相上、而R₂携带一个标记，其中R₁的基本组成为被待测定的抗体特异性识别的呈多聚体形式的结合配偶体、而R₂也可以选择地为所述的结合配偶体，并且使用呈单体形式的特异性相同的结合配偶体来减少IgG抗体的干扰。

具体地说，本发明涉及一种在有IgG类免疫球蛋白和干扰因子(诸如类风湿因子)存在下，特异性地检测IgM类免疫球蛋白的方法。

为了对外源物质的引入产生响应，哺乳动物生物体的免疫系统产生了亦被称为免疫球蛋白的抗体。它们防御亦被称作抗原的外源物质。可以把免疫球蛋白划分为五个不同的种类。人们在M，G，A，E和D类的免疫球蛋白之间进行划分。这五类免疫球蛋白的每一种都在重链的组成上有所不同，被称作μ、γ、α、ε和δ链。

每一类免疫球蛋白在生物体中都具有不同的功能。在与抗原的第一次接触、即所谓的初次免疫接种之后，出现了M类免疫球蛋白。但是，随着感染的进行，这些免疫球蛋白的浓度迅速降低。G类免疫球蛋白在初次免疫接种之后首先缓慢地形成，并且当用同一抗原进行第二次感染时大量地出现。A类免疫球蛋白是在生物体的粘膜表面上发现的，并且它决定着该处的防御过程。E类免疫球蛋白主要导致过敏反应。D类免疫球蛋白的确切功能迄今仍是未知的。

在血液中，各个种类的免疫球蛋白存在的浓度差别非常大。因此，G类免疫球蛋白(IgG)是正常人血清中的主要种类，其份额约为75％，这对应于8至18mg/ml的血清含量。第二种最频繁出现的免疫球蛋白为IgA，它的平均血清浓度为0.9至4.5mg/ml。M类免疫球蛋白存在的浓度为0.6至2.8mg/ml，D类免疫球蛋白存在的浓度为0.003至0.4mg/ml。IgE抗体的比例是最低的，它在血清中仅以0.02至0.05μg/ml的浓度存在。

为了有区别地诊断许多的疾病，重要的是检测对具体的抗原具有特异性的一类或几类非常具体的免疫球蛋白的抗体。仅仅可以通过种类-特异性抗体测试或者通过排除某些种类的免疫球蛋白的存在(例如，检测IgG和IgA抗体、而不检测IgM抗体)来保证对病毒、细菌和寄生虫感染的令人满意的诊断。这对于区分新近的或者急性的感染和更早些时候已经发生的感染以及对于临床监测感染的过程来说是特别重要的。抗体的种类-特异性检测对HIV、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、弓形体病病毒、风疹病毒和衣原体的感染来说尤其重要。当测定保护抗体的滴度以及检查免疫接种是否成功的时候，特异于具体抗原的抗体的种类-特异性检测也是必需的。为了诊断新近的急性感染，特别有兴趣的是检测对抗原具有特异性的IgM类抗体。但是，多种干扰因子(比如特异性相同的IgG抗体的存在)频繁地干扰着抗原-特异性IgM抗体的检测。

在现有技术中，已经描述了多种用于检测对抗原具有特异性的具体种类的抗体的方法。因此，通过把特异性抗体结合到用特异性的抗原包被的固相上，频繁地检测具体种类的抗原-特异性抗体。通过把特异性地针对某类人Ig的抗体结合到待检测的Ig分子上，检测特异于抗原的、目前被结合到固相上的免疫球蛋白(Ig)。给针对人Ig的抗体提供一个标记，借此进行检测。但是，这样的一种测试方法仅在下列情况下是可能的，即如果在与针对人Ig的种类-特异性标记的抗体反应之前，通过洗涤除去所有的非特异性非结合的Ig。因此，作为通常需要的、用于自动系统的一步测试方法是不可能的。此外，对抗原具有特异性的所有种类的抗体都在第一步中结合到固相上。如果抗原对固相的包被不是足够充分的话，那么可能会发生多种抗体结合到抗原上的竞争反应。这会削弱测试的灵敏度。

由所谓的桥测验(Bruckentest)提供了以一步测试进行抗体检测的一种可能性。在EP-A-0 280 211中描述了桥测验的概念。在该方法中，把能够特异性地结合到待测定的抗体上的第一受体(比如抗原)结合到固相上。待测定的抗体结合到固相-结合的抗原上。此外，在测试混合物中存在另一种提供了标记的特异性抗原。通过标记来检测抗体。但在这种测试中，检测了所有的抗原-特异性抗体、而不仅仅是具体种类的抗体。