[发明专利]用脂酶进行苯并二氮杂－乙酸酯的酶拆分

说明书

                   发明领域

本发明涉及用脂酶进行化合物的旋光异构体的拆分。

                   发明背景

人们熟知可以用蛋白水解酶水解酯。在某些情况下，当底物酯具有一个或多个手性碳原子时，该蛋白水解酶可以同外消旋混合物中的一种对映体比另一种对映体更快地反应。对于适当的底物，这种化学选择性可以用作该混合物拆分的基础。此种选择性水解反应的产物为反应的对映体的羧酸和醇，而未反应的对映体仍然为酯。随后所述酯和酸的易分离性成为羧酸或醇部分立体化学纯化的基础。

一般而言，当手性和复杂性残留于分子的羧酸部分时，则用酯酶或蛋白酶制备相应的手性酸，而当复杂性和手性残留于醇部分时，那么则用脂酶制备手性醇。然而，人们也已知用脂酶拆分手性酸的部分实例。

该方法的立体化学纯度通常取决于外消旋物的每种异构体的水解速率，如相对速率差异越大，最终手性产物的纯度则越高。不论能否发现适当的酶，选择性水解给定的化合物的适当酶的选择通常凭经验决定。因此，作为有用的酶，该酶必须以所需化合物为底物、仅选择性水解适当的对映体并产生可接受的对映体过量(e.e.)。

WO 93/00095(PCT/US/92/05463)和WO 94/14776(PCT/US93/12436)、WO 95/18619(PCT/US95/00248)和PCT/US96/11108公开了部分具有药用价值的苯并二氮杂化合物。此类化合物就是这种情况，其药理活性主要于在其中报道的外消旋物的一种对映体中。因此，人们需要制备非外消旋化合物的方法。在其中报道的方法基于通过手性高效液相层析(HPLC)和纯手性合成分离对映体。然而，HPLC方法通常具有难以大规模进行的缺点，而手性合成则基于昂贵的手性合成子，并可能在合成中产生部分外消旋。因此，需要新的制备此类化合物的立体选择性方法。

我们现已发现通过用得自酵母Candida Antarctica的脂酶立体选择性水解外消旋混合物的拆分方法，可以制备非外消旋形式的WO93/00095(PCT/US/92/05463)、WO 94/14776(PCT/US93/12436)和WO95/18619(PCT/US95/00248)中公开的化合物。该拆分方法容易进行并具有高度选择性，并代表了手性3-氧代-1，4-苯并二氮杂乙酸化学领域的重大突破。用酶水解进行外消旋苯并二氮杂的拆分先前未有报道。

                     本发明简述

一方面，本发明为用得自Candida Antarctica的脂酶选择性水解手性酶之一，从而拆分某些外消旋取代的3-氧代-2，3，4，5-1H-四氢-1，4-苯并二氮杂-2-乙酸酯的方法。

本发明的另一方面为基本上对映体纯取代的3-氧代-2，3，4，5-1H-四氢-1，4-苯并二氮杂-2-乙酸化合物，特别是通过酶水解过程从外消旋化合物中制备的这样一种化合物。

在另一个方面，本发明为提高3-氧代-2，3，4，5-1H-四氢-1，4-苯并二氮杂-2-乙酸立体化学纯度的方法。

在再一个方面，本发明包括用于药用产物合成的特定的中间体化合物。

最后，本发明为固相化的Candida Antarctica脂酶B的制备和产生这样一个制备的方法。

                   本发明的详述