[发明专利]人胚肺成纤维细胞二倍体细胞株和利用其生产水痘带状疱疹病毒的方法

说明书

发明领域

本发明涉及适于生产病毒的新的人胚肺成纤维细胞二倍体细胞株和利用该细胞株作为宿主细胞制备水痘带状疱疹病毒的方法。

现有技术的描述

病毒引起各种疾病如麻疹，风疹，流行性腮腺炎，水痘，流行性出血热，流行性乙型脑炎，婴儿脊髓灰质炎，甲型肝炎，乙型肝炎，-丙型肝炎和天花。用从灭活的或减毒的致病病毒制备的疫苗接种可以防止这些病毒疾病。

通常，可以利用成胚胎的鸡蛋，幼鼠的脑细胞和哺乳动物的二倍体细胞作为生产这些病毒疫苗的宿主细胞。虽然可以利用成胚胎的鸡蛋或幼鼠的脑细胞作为宿主细胞以便减少生产费用，但由于对病毒的低敏感性，复杂的纯化过程和由于存在外源蛋白污染引起的副作用，它们不具备优势。相反，使用起源于人的正常二倍体细胞能减少外源蛋白引起的副作用，所以，制备病毒疫苗时它们更优选。

代表性的二倍体细胞包括MRC-5细胞株(ATCC CCL 171)，WI-38细胞株(ATCC CCL 75)，和HEL 299细胞株(ATCC CCL137)：具体地说，MRC-5细胞株起源于14周龄的雄性胚胎的肺组织[Proc.Symp.Human Diploid Cells，Yugoslavia，Acad.Sci.Arts.Zagreb.，pp 43-45(1970)；和自然(伦敦)，227，pp 168-170(1970)]；WI-38细胞起源于3个月大的雌性胚胎的肺组织[Exp.Cell Res.，25，p 585(1961)；和Am.J.Hyg.，75，p 240(1962)]；HEL299细胞株从雄性胚胎的肺组织得到[W.D.Peterson，Jr.et al.，Proc.Soc.Exp.Bio l.Med.，128，p772(1968)]。

水痘是高度接触传染的疾病，它使免疫力降低的儿童，成年人由于感染了水痘带状疱疹病毒(VZV)而遭受折磨。已经有报道，VZV可以在各种细胞如人羊膜细胞，人甲状腺细胞，人肺细胞，人宫颈癌细胞和猴肾细胞中培养[E.V.Meurisse et al.，J.Microbiol.，2，317(1969)]。另外，美国专利3,985,615中公开了通过在豚鼠初级胚胎组织细胞(GPEC)中多次减毒Oka病毒生产VZV疫苗；美国专利4,000,256叙述了将含有VZV病毒的人胚成纤维细胞WI-38细胞株传代培养10-80次来生产VZV疫苗；美国专利5,360,736公开了在MRC-5细胞株中生产VZV疫苗的改进方法。

然而，GPEC细胞中VZV的产量是非常低的。另外，WI-38和MRC-5细胞株有高的传代数，从而减低了它们生产VZV的能力。所以，上述方法不能用于大规模生产VZV疫苗。另外，由于其依赖细胞的特性，VZV在无细胞环境趋于失活。

发明概述

因此，本发明的一个目的是提供对于各种病毒特别是VZV具有高敏感性并提供高产量的VZV的新的人二倍体细胞株。

本发明的另一个目的是提供改进的生产VZV的方法。

根据本发明的一个方面，提供了起源于人胚肺细胞的成纤维细胞二倍体细胞株LBHEL(KCTC 0127BP)。

根据本发明的另一个方面，提供了生产无细胞水痘带状疱疹病毒(VZV)的方法，该方法包括如下步骤：

(a)在培养容器中培养人胚肺成纤维细胞二倍体细胞株LBHEL(KCTC 0127BP)得到培养的LBHEL细胞；

(b)用VZV感染培养的LBHEL细胞得到VZV感染的细胞；

(c)培养和收获VZV感染的细胞；

(d)破碎收获的细胞以得到细胞匀浆；和

(e)离心细胞匀浆以得到含有无细胞VZV的上清液。

附图的简要说明

配合附图，根据下面的说明本发明的上面的和其它的目的和特征将变得明了：

图1-1和1-2示出本发明的LBHEL细胞株的核型；

图2示出了本发明的LBHEL细胞株(◆)，MRC-5细胞株(■)和HEL299细胞株(△)的生长曲线；

图3示出了在含有5％或10％FBS的DME培养基中培养本发明的LBHEL细胞株，MRC-5细胞株和HEL299细胞株后的细胞计数；

图4表示了本发明的LBHEL细胞株中的无细胞VZV的噬斑形成单位(PFU)随感染复数的变化；

图5表示在本发明的LBHEL细胞株中的无细胞VZV的PFU对细胞病变效应的依赖性；

图6证明了作为未感染的LBHEL细胞株含量的函数的无细胞VZV的PFU的变化；和