[发明专利]一种具有半乳聚糖酶活性的酶

权利要求书

1．一种从真菌中获得的半乳聚糖酶，这种酶的最适pH大于5.9。

2．按照权利要求1的半乳聚糖酶，这种酶来源于丝状真菌的菌株或者酵母的菌株。

3．按照权利要求2的半乳聚糖酶，其中所说的丝状真菌的菌株是核菌纲的菌株。

4．按照权利要求3的半乳聚糖酶，其中所说的核菌纲的菌株是粪壳目的菌株，如腐质霉属、毁丝霉属、蛾柱霉属、毛壳菌属、黑孢壳属、Cercophora、麻孢壳属、脉孢菌属、柄孢壳属、梭孢壳属的菌株，特别是M.Thermophilum或者H.insolens的菌株。

5．一种含有DNA序列的DNA构建体，所说的DNA序列编码按照权利要求1-4中任一项的半乳聚糖酶。

6．一种编码显示出半乳聚糖酶活性的酶的DNA构建体，这种DNA序列在低严格条件下能够与探针杂交，所说的探针是用从Humicolainsolens(DSM 1800)分离的DNA和/或从Myceliophthora Thermophila(CBS 117.65)分离的DNA与下列PCR引物对进行的PCR反应的产物：

＂5′-CTA TTC GGA TCC AG(C/T)GA(C/T)AC(A/C)TGG GC(G/C)GA(C/T)CC(G/T)GC(G/T)C-3′″[SEQ ID NO 5]作为有义引物，和

＂5′-CTA ATG TCT AGA(A/G)AT CCA(A/G/C/T)GC(A/G/C/T)GG(C/T)TC CCA(A/G)TA AAA-3′″[SEQ ID NO 6]作为反义引物。

7．按照权利要求6的DNA构建体，其中所说的DNA序列编码具有半乳聚糖酶活性的酶，这种酶包含下列部分氨基酸序列：

a)Ser(S)-Asp(D)-Thr(T)-Trp(W)-Ala(A)-Asp(D)-Pro(P)-Ala(A)-

  His(H)和/或

b)Phe(F)-Tyr(Y)-Trp(W)-Glu(E)-Pro(P)-Ala(A)-Trp(W)-Ile(I)。

8．一种包含DNA序列的DNA构建体，这种DNA序列编码显示出半乳聚糖酶活性的酶，此DNA序列包括：

(a)克隆到质粒pYES 2.0中的DNA序列的半乳聚糖酶编码部分，所说的质粒存在于酿酒酵母DSM 9983中；

(b)在SEQ ID NO 1的1-1050位、更优选55-1050位中所示的DNA序列，或者它的互补链；

(c)在(a)或(b)中限定的DNA序列的类似物，其和所说的DNA序列至少有70％的同源性；

(d)在低的严格性条件下与SEQ ID NO 1的1-1050位所示的DNA序列杂交的DNA序列；

(e)一种DNA序列，由于遗传密码的简并性，其不能和(b)或(d)序列杂交，但是其编码与由这些DNA序列中任一种编码的多肽具有相同的氨基酸序列的多肽；或

(f)一种DNA序列，其是(a)、(b)、(c)、(d)或(e)中限定的DNA序列的等位形式或片段。

9．一种包含DNA序列的DNA构建体，这种DNA序列编码显示出半乳聚糖酶活性的酶，此DNA序列包括：

(a)克隆到质粒pYES 2.0中的DNA序列的半乳聚糖酶编码部分，所说的质粒存在于酿酒酵母DSM 9976中；

(b)在SEQ ID NO 3的1-1047位、更优选58-1047位中所示的DNA序列或者它的互补链；

(c)在(a)或(b)中限定的DNA序列的类似物，其和所说的DNA序列至少有70％的同源性；

(d)在低的严格性条件下与SEQ ID NO 3的1-1047位所示的DNA序列杂交的DNA序列；

(e)一种DNA序列，由于遗传密码的简并性，其不能和(b)或(d)序列杂交，但是其编码与由这些DNA序列中任一种编码的多肽具有相同的氨基酸序列的多肽；或

(f)一种DNA序列，其是(a)、(b)、(c)、(d)或(e)中限定的DNA序列的等位形式或片段。

10．按照权利要求6-9中任一项的DNA构建体，其中编码显示出半乳聚糖酶活性的酶的DNA序列是可以从微生物，优选的是丝状真菌、酵母或者细菌获得的。