[发明专利]Exodus化学激活素物质及方法

说明书

本发明一般涉及化学激活素、更具体地说涉及纯化的和分离的编码命名为Exodus的人C-C化学激活素及其类似物的多聚核苷酸，涉及由所述多聚核苷酸编码的纯化的和分离的化学激活素多肽，涉及用于这些多肽之重组生产的材料和方法，涉及这些多肽的治疗用途、特别是化疗中的脊髓保护、治疗骨髓组织增生性疾病和用于治疗获得性免疫缺陷综合症(AIDS)。

本发明背景技术

化学激活素(亦称为“间分泌素”和“SIS细胞因子”)包括一个超家族的小分泌蛋白(约70-100氨基酸，大小约8-12千道尔顿)，它们主要调节白细胞迁移和激活，因此帮助刺激和调节该免疫系统。该“化学激活素”名称来自名词趋化细胞因子，指这些蛋白质刺激白细胞趋化性的能力。确实，化学激活素可以包括炎症细胞进入病理组织的主要引诱剂。[一般参见Baggiolini等，Advances in Immunology,55:97-179(1994)；Oppenheim,The Chemokines,Lindley等编辑，第183-186页，Plenum Press,NY(1993))]。尽管化学激活素一般由白细胞分泌，但有几种化学激活素在众多组织中表达。Baggiolini等，见上述，表Ⅱ。一些化学激活素亦激活或吸引除白细胞之外的多种细胞，例如内皮细胞和成纤维细胞。

以前鉴定的化学激活素一般展示彼此之间有20-70％的氨基酸相同并含有四个高度保守的半胱氨酸残基。根据这些半胱氨酸残基的前二个残基的相对位置，已经将化学激活素进一步分类为二个亚家族。在“C-X-C”或“α”亚家族(由定位于第4条人染色体上的基因编码)中，前二个半胱氨酸被一个氨基酸隔开。在“C-C”或“β”亚家族(由基因定位于第17条人染色体上的基因编码)中，前二个半胱氨酸相邻。对几种化学激活素的X-射线晶体学和NMR研究已经表明在每个家族中，第一和第三个半胱氨酸形成第一个二硫桥，而第二个和第四个半胱氨酸形成第二个二硫桥，强烈地影响所述蛋白的天然构象。仅在人类中，对每个化学激活素亚家族已描述了将近十个不同的序列。这两个亚家族的化学激活素都有20-25个氨基酸的特征前导序列。

当比较任何二种氨基酸序列时，C-X-C化学激活素(包括IL-8、GROα/β/γ、血小板碱性蛋白、血小板因子4(PF4)、嗜中性粒细胞激活肽-2(NAP-2)、巨噬细胞趋化激活因子(MCAF)、IP-10和其它化学激活素)有25％-60％的相同性(除了GROα/β/γ成员，它们之间有84-88％相同性)。大多数的亚家族成员(不包括IP-10和血小板因子4)在前二个半胱氨酸残基的上游都有一共同的E-L-R三肽基元。C-X-C化学激活素一般是嗜中性粒细胞的有效刺激剂，导致迅速的外形改变、趋化性、呼吸释放和去颗粒。某些C-X-C化学激活素(包括IL-8)N末端氨基酸序列的特定截短与活性的显著增加相联系。

C-C化学激活素(包括巨噬细胞炎症蛋白MIP-1α[Nakao等，Mol.Cell Biol.,10:3646(1990)]和MIP-1β[Brown等，J.Immunol.,142:679(1989)]、单核细胞趋化蛋白MCP-1[Matsushima等，J.Exp.Med.,169:1485(1989)]、MCP-2[Van Danune等，J.Exp.Med.,176:59(1992)和Chang等，Int.Immunol.,1:388(1989)]和MCP-3[Van Damme等，见上述]、RANTES[Schall等，J.Immunol.141:1018(1988)]、Ⅰ-309[Miller等，J.Immunol,143:2907(1989)]、eotaxin[Rothenberg等，J.Exp.Med.,181:1211-1216(1995)]和其它，相互之间有25％-70％的氨基酸相同。C-C化学激活素一般激活单核细胞、淋巴细胞、嗜碱细胞和嗜酸性细胞，但不激活嗜中性粒细胞。大多数已报道的C-C化学激活素激活单核细胞，导致钙流出和趋化性。在淋巴细胞例如对RANTES最强烈应答的T-淋巴细胞上可以看到更加选择性的效果。

根据结构同源性和相似活性可以将C-C化学激活素进一步亚分类。与该家族的其它成员相比，MIP-1α、MIP-1β和RANTES有更相近的同源性和生物学活性范围。C-C化学激活素家族的另一亚家族是单核细胞趋化蛋白(MCP)，它们相互之间在结构上比C-C化学激活素家族的其它成员更相似，并且优先刺激单核细胞迁移和对炎症刺激物应答。