[发明专利]用于消除在对白蛋白进行测定时血红蛋白干扰的方法

说明书

本发明涉及一种采用光学测量对含有游离的血红蛋白的试样中的白蛋白进行测定的方法。

已知对血清和血浆中的白蛋白进行的非免疫的测定(例如采用溴甲酚绿方法)将受到血红蛋白(Hb)和与血红蛋白类似的化合物的干扰，其中由于该干扰物质的存在，因而所获得的白蛋白值将被虚假地增大。其原因在于血红蛋白与色素的反应，从而使血红蛋白(Hb)的数量被当成了白蛋白(Doumas等，临床化学学报(Clin.Chim.Acta)31,87-96页(1971年))。

在专利说明书EP 0268 025 B1中指出，通用的两点测量并不能消除白蛋白测试的Hb干扰。而且建议，根据溶血度与测量误差的关系求出修正系数并借助此修正系数(在单独测定溶血度后)对针对某样品获得的具有误差的白蛋白结果进行计算修正。

Jay和Provasek(临床化学(Clin.Chem.)39/9,1804～1810页(1993年)指出，在其实验室内对可检测的溶血试样单独测定该试样的血红蛋白含量并采用计算机程序对分析测定的(虚假的)结果进行计算修正。接着在分析化验的结果中反映出此修正的量度。

在公开说明书DE 44 274 92 A1中记载了另外一种用于修正血红蛋白对白蛋白测定干扰的方法。在这里不对溶血度单独进行测定，这是因为可以由前置于固有的主反应的前置反应推导出该溶血度。根据所谓的Rateplus方法，将利用求出的溶血度与干扰程度的关系对在主反应中获得的测量结果进行计算修正。

采用迄今所述的、用于消除在测定白蛋白时血红蛋白干扰的方法时一般需要对分析结果计算修正一个与血红蛋白含量相应的数值。对血红蛋白含量及溶血度或者通过单独测量(例如通过多波长分析或独立的方法)求出或者通过前置反应推导出，其中总是需要双试剂试验。

但目前经常采用的是利用单试剂的单点测量形式白蛋白的测定，其中通过试样与试剂的混合开始颜色反应(例如Fa.Boehringer MannheimGmbH的白蛋白-试剂)。这种测定的优点是除了操作简单外，而且成本低廉。但消除血红蛋白的干扰是昂贵的，不管是单试剂和对血红蛋白含量单独求出，还是双试剂试验和省去单独求出血红蛋白含量。在任何情况下都需要接着对所获得的分析结果进行计算修正。

另外在对含有血红蛋白的血清-或血浆试样进行测定时主反应(白蛋白与试剂)被干扰反应(血红蛋白与试剂)和伴随干扰反应的血红蛋白吸收信号的递减所叠加。另外依赖于所采用的白蛋白试剂，无论是主反应还是干扰反应的吸收光谱都是不同的。

意外地发现，干扰反应对主反应结果的影响与所采用的测量波长组合有关并且另外也与反应时间有关。

消除在测定白蛋白时的血红蛋白干扰因而是很复杂的，这是因为在这里涉及的不是通常定义的干扰信号，这种通常定义的干扰信号通过简单的双色测量或通过简单的试样空白值的测量可被消除。确切地说，干扰物质，即自然的、交联的、聚合的或重组制得的血红蛋白本身直接与试剂进行反应。所以必须探寻可以将该干扰反应明确地与固有的主反应区分开的测量波长组。

该任务的解决方案是在进行双色测量时，改变测量波长组，即主测量波长和副测量波长。意外地发现，在改变波长组时由试样中含有的游离的血红蛋白引起的测量误差基本上受到抑制(参见图1、3、4、5、7、8、10和11)。在采用通常不位于试验试剂吸收最大值处的波长组时，含有血红蛋白的试样的测量信号与时间相关进行变化，而不含有血红蛋白的试样的测量信号基本保持恒定不变。

但在通常测定白蛋白时采用的波长组，即主波长600纳米和副波长700纳米时是观察不到此效应的。在这种情况下对应于不含有血红蛋白的试样，含有血红蛋白的试样将有很大的测量误差(参见图2、6和9)。

故本发明的主题是一种采用至少两个波长通过光学测量对含有游离的血红蛋白的试样中的白蛋白进行测定的方法，其特征在于：

(a)在采用第一测量波长时存在有其大小足以测定的白蛋白测量信号，

(b)在采用第二测量波长时(ⅰ)不存在白蛋白的测量信号或(ⅱ)存在有比在采用第一测量波长时的测量信号更小的白蛋白的测量信号和

(c)在采用第一和第二测量波长时存在有一个可比较的强干扰信号，该干扰信号是由于血红蛋白与为测定白蛋白所采用的试剂进行反应产生的并且随时间变化。