[发明专利]朊病毒的色谱分离方法

说明书

本发明的技术领域

海绵状脑病是哺乳动物的中枢神经系统的疾病，其造成过早痴呆，而且一般都是致命性的。这种脑病中的一些是涉及人类的，例如，皮质-纹状体-脊髓变性症、库鲁病、脑顶枕叶综合症、羊痢疾、牛海绵状脑病等。虽然有很强的证据表明这些疾病都是由共同的病原体或一些紧密相关的病原体所引起的，但是，对这些病原体的本质的了解还很少[Prusiner,Science 252:1515-1522(1991)]。不断增长的证据建议，转译后修饰的抗蛋白酶形式的宿主细胞蛋白在致病性方面起着重要的作用，但是，尚不清楚的是，是否这种被修饰的蛋白自身就是病原体或它仅仅是病原体的必要组成部分。这种蛋白已经被定名为朊病毒蛋白(此后简称为“PrP”)，而海绵状脑病的致病物被称为朊病毒。

一般而言，虽然它们不是传染性的，但是，已经有证据表明，在某些条件下，有一些海绵状脑病可以从一个动物个体传递到另一个动物个体，而且，在一些病例中，可以发生物种之间的传递。例如，在七十年代报道的一系列皮质-纹状体-脊髓变性症的病例中，那些患病个体都经过从收集的垂体提取的人生长激素的治疗[Brown et al.,N.Eng.J.Med.313:728-731(1985)]。据信，第一例牛海绵状脑病是因为污染的食物将羊痢疾传染给小牛而引发的。另外，将被污染的羊的组织颅内注射给小鼠后，已经建立了羊痢疾的鼠模型。

对组织中或其它的生物产品中的朊病毒的鉴定方法，目前仍然依靠用被怀疑的物质的提取物对小鼠或仓鼠进行感染后的检测。但是，由于对这些疾病的培养的时间可以长达一年甚至更长，因此，这些鉴定方法是即费时，又昂贵的。

与朊病毒有关的疾病的普遍发生以及可能发生物种间的传染都对生物工业带来了严重的影响，因为生物工业从哺乳动物的组织中获取众多的产品[Di Martino,Biologicals 21:61-66(1993)]。对这些产品的安全性的关注导致了对朊病毒的灭活的众多研究。这些研究表明，朊病毒比更为常规的病原体如病毒和细菌等都更具有对灭活的抵抗性。因此，对于含有朊病毒的生物材料的净化就需要更为猛烈的条件。目前所知道的对含有高效价朊病毒的生物材料的消毒方法仅有长时间的在130℃或更高温度下的蒸煮消毒和用高浓度的氢氧化钠溶液进行处理。这些方法已经被推荐为常规的朊病毒灭活方法[Department of Health and SocialSecurity Circular 84:16(1989)]。还被报道过的是，以100kD为限的超滤并结合用6M的脲的处理也得到了对含有朊病毒的制剂的消毒结果[Pocchiari et al.,Arch.Virol.98:131-135(1988)]。其它的降低朊病毒活性的方法包括用有机溶剂、清洁剂、蛋白变性剂、离液序列高的盐和酚来进行处理[Millson et al.,in Prusiner andHadlow,eds.Slow Transmissible Diseases of the Nervous System,vol.Ⅱ.New York:Academic Press 409-424(1979)；Prusiner et al.,PNAS 78:4606-4610(1981)；Kimberlin et al.,J.Neurol.Sci.59:390-392(1983)；Walker et al.,Am.J.Public Health 73:661-665(1983)；Brown et al.,J.Infect.Dis.153:1145-1148(1986)]。

去除朊病毒的传染性所需要的极端化条件一般都与保存生物分子的有用活性的方法不相容，结果造成众多生物分子变性和基本上破坏了它们的活性。因此，就需要有能够在不使所需要的生物活性受到损害的条件下对朊病毒进行灭活或将其从生物材料中分离出来的方法。本发明的概述

在本发明涉及将朊病毒从含有朊病毒和至少一种其它的生物分子的溶液中分离出来的方法。

本发明的方法包括的步骤有，在造成梯度洗脱的条件下将溶液通过阴离子交换色谱柱，将朊病毒与该至少一种的另外的生物分子分离，使所述的生物分子被收集在与含有朊病毒的洗脱组分不相同的洗脱组分中。

在另一个实施方案中，本发明提供了从含有朊病毒和血红蛋白的溶液中去除朊病毒的方法。该方法包括的步骤有，在造成梯度洗脱的条件下将溶液通过阴离子交换色谱柱。将朊病毒与血红蛋白分离，洗脱的朊病毒所在的组分不同于含有血红蛋白的组分。